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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
241
- 英文名:
Protein deglycosylated mixture
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
20次
特别提示:包括蛋白去糖基化混合液在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:蛋白去糖基化混合液
英文名称:Protein deglycosylated mixture
产品货号:SV1485
产品规格:20次
特性:
可快速建立反应
混合糖苷酶有效去除 N-及 O-连接糖链
可用于变性及非变性反应条件
去糖基化后留下完整核心结构适用于后续研究
概述:
蛋白去糖基化混合液中包含各种糖苷酶、试剂和对照,能去除所有 N-连接糖链及简单 O-连接糖链,也能去除部分复杂 O-连接糖链。试剂盒中的酶能用于 20 次反应,作用于 2 mg 糖蛋白。
随酶提供:
去糖基化酶混合液
10X 糖蛋白变性缓冲液
10% NP-40 缓冲液
10X GlycoBuffer 2 反应缓冲液
胎球蛋白对照
去糖基化酶混合液
20 μl PNGase F(无甘油):500,000 units/ml
20 μl O-糖苷酶:40,000,000 units/ml
20 μl 神经氨酸苷酶:50,000 units/ml
20 μl β1-4 半乳糖苷酶:8,000 units/ml
20 μl β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶:4,000 units/ml
除了蛋白去糖基化混合液,,我公司还供应以下相关产品:
名称:快速末端平齐化 试剂盒
货号:SV1006
规格:100次|20次
特性:
30 分钟内可完成限制性内切酶消化后 DNA 的末端平齐化
即用型预混液在室温即可进行反应
适用于限制性内切酶消化后的 DNA,已剪切或雾化的 DNA 或 PCR 产物
概述:
快速末端平齐化试剂盒将不匹配的 DNA 5´ 或 3´ 突出末端转变为带有 5´ 磷酸的平末端,以便有效地与平末端 DNA 克隆载体连接。用 T4 DNA 聚合酶(M0203)使 DNA 末端平齐化,该酶同时具有 3´ →5´ 外切酶活性和 5´ →3´ 聚合酶活性。酶混合液中的另一成分是 T4 多聚核苷酸激酶(M0201),可将平末端 DNA 的 5´ 端磷酸化,以用于与克隆载体的连接反应。本试剂盒经过优化,可在单次反应中将 5 μg 的 DNA 末端平齐化。
应用:
• 对已剪切、雾化、或经限制性内切酶消化的 DNA 进行末端平齐化,便于与质粒、cosmid、fosmid 和 BAC 载体连接
• PCR 产物在进行平末端克隆前进行末端平齐化
快速末端平齐化TM试剂盒组份
- 平齐化酶混合液
- 10X 平齐化反应缓冲液
- 1 mM dNTP 混合液
质保声明:
快速末端平齐化试剂盒经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们咨询。
热失活:
70℃ 加热 10 分钟。
注意事项:
PCR 产物在进行末端平齐化之前必须纯化,可采用商业纯化试剂盒、酚抽提/乙醇沉淀法或者凝胶电泳的方法纯化 DNA。经限制性内切酶消化的 DNA 无需纯化可直接进行末端平齐化反应。
名称:pSNAPf 载体
货号:SV1613
规格:20μg
特性:
提供可在哺乳动物和细菌中表达的载体
提供定位于细胞表面和内部的对照质粒
推荐测序引物 (我公司不提供) 如下:
SNAP/CLIP 正向引物 (20-mer)
5´d(ATCCCCTGCCACCGGGTGGT)3´
SNAP/CLIP 反向引物 (18-mer)
5´d(CTGGGGCAGGCACTTCCA)3´
SNAP/CLIP CMV 正向引物 (18-mer)
5´d(GACGCAAATGGGCGGTAG)3´
TR 1 反向引物 (19-mer)
5´d(GCTGCGCAACTGTTGGGAA)3´
SNAP/CLIP ST 1 反向引物 (20-mer)
5´d(AGGGAGTACTCACCCCAACA)3´
T7 通用引物
5´d(TAATACGACTCACTATAGGG)3´
T7 末端反向引物
5´d(TATGCTAGTTATTGCTCAG)3´
概述:
我公司提供几种表达载体,该载体能表达携带有 SNAPtag 和 CLIP-tag 的融合蛋白,适用于在哺乳动物及细菌中标记,相应的启动试剂盒也包含有相应的载体。哺乳动物 SNAPf 和 CLIPf 载体表达 SNAP- 和 CLIP-tags的速度较之前的载体更快。表达载体中,tag 的上、下游具有改造后的多克隆位点,使得 tag 可以表达在目的蛋白的任何一端,该表达过程受 CMV 启动子调控。SNAPf-tag 和 CLIPf-tag 表达载体中携带新霉素抗性基因(NeoR),可用于筛选稳定转染子。载体上还带有一个 IRES 元件,有助于融合蛋白和 NeoR 的高效表达。为在哺乳动物细胞中高效表达,Tag 基因中的密码子已经过优化。我公司还提供对照质粒,这些质粒编码的融合蛋白分别定位于细胞核(H2B)、线粒体(Cox8A)和细胞表面(ADRβ2,NK1R), 相应的启动试剂盒中包含相应的对照质粒(见 264 页)。
细菌表达载体 pSNAP-tag (T7)-2 包括位于 SNAP-tag上、下游的克隆位点,受 T7 启动子调控。为在 E. coli中高效表达,SNAP-tag 基因中的密码子已经过优化。
来源:
通过标准的质粒纯化程序,分离自 E. coli 菌株。质粒已去除内毒素,可用于高效转染。
浓度:
500 μg/ml。
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文献和实验板液体每孔在 2ml 左右,不宜太多,或者太少。取两个 1.5mlEP 管,记为 A 管,B 管,每个 EP 管加入 250ul Opti-MEM I,然后 A 管加入 5-10ul lipofectamine 2000,B 管加入 100pM-200pM 的 siRNA(见买来的 siRNA 说明书),然后静置 5min,混合在一起,静置 20min,用 AB 混合液加入到 1.5ml 的无血清培养基 C 内,混匀; 将六孔板里的细胞的液体吸出,用 PBS 清洗两遍; 将 ABC 混合液 2ml
准备新的聚丙烯酰胺混合液,然后将新的胶倒入旧胶的上方。但是显然这种连接不是非常牢固。 我推荐重新倒胶,制胶很关键,如果你后续还要做 blot,胶没有跑好浪费太多。 这块胶每孔上样量过大。大多数的泳道还是能分清条带,但是在 3、4 道涂抹痕迹非常明显。这些泳道的样品主要含有一种蛋白(血红蛋白的亚基),与 9、10 道一样。 但是,3、4 道的样品低估了红细胞裂解物和红细胞胞浆组分中的蛋白含量。这些组分包含了过多的蛋白以至于样品需要稀释后才能进行蛋白含量测定。但是这名
板置于显微镜下。在不破坏单层细胞的情况下,用移液器吸头轻轻移出自由漂浮的球体,并将其转移到 1.5ml 的离心管中。让球状体在离心管底部沉降 5-10 min,必要情况下可以用微量离心机低速离心 10s。 9、将吸出的球体接种于 200μl 含蛋白浓度 8.0mg/ml 的 Matrigel 胶中,轻轻吹打混匀,迅速操作并防止气泡产生。 10、在 24 孔板的每个培养孔中心接种 25μl 混合液,放入 37℃ 培养箱中静置 10min。待 Matrigel 凝固后,加入 0.5ml hLOs
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