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- 文献和实验
- 技术资料
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226
- 英文名：
C-DsRed plasmid（with CMV promoter）
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
特别提示：包括C端DsRed标签融合蛋白质粒(红色荧光蛋白)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：C端DsRed标签融合蛋白质粒(红色荧光蛋白)
英文名称：C-DsRed plasmid（with CMV promoter）
产品规格：1μg
本质粒是哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端含DsRed (Discosoma sp. red fluorescent protein，香菇珊瑚红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个DsRed的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有DsRed标签的融合蛋白。利用DsRed的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用DsRed抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。DsRed与GFP没有序列同源性，不能使用GFP抗体检测DsRed。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
本质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| Multiple cloning site | 651-740 |
| DsRed | 741-1419 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 1478-1499 |
| SV40 polyA signal | 1511-1894 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 2032-2338 |
| bla promoter | 2363-2487 |
| SV40 promoter | 2507-2845 |
| Neomycin/kanamycin resistance ORF | 2869-3661 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3662-4130 |
| pUC origin | 4259-4926 |
本质粒(4969bp)的图谱如下：
使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件：-20℃。
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文献和实验经常用于亲和纯化的His-Tag，该His-Tag也可用于通过蛋白质印迹纯化后鉴定融合蛋白。以下是通过Ni-NTA旋转试剂盒（QIAGEN）在天然条件下纯化蛋白质的方法。蛋白质印迹分析融合蛋白的表达。在大肠杆菌 BL21菌株中表达TBO的融合蛋白，经NI-NTA旋转试剂盒纯化后，使用抗His标签抗体通过Western印迹分析蛋白质。Trx。Tag + TBO为22 KDa将来自5-ml培养体积的沉淀重悬于630μl裂解缓冲液（NPI-10）中，在冰上以30秒的间隔超声处理细胞悬浮液10秒短暂10
处理过的融合蛋白的2倍以上，这也说明标签的存在降低了该酶的活性。可以用固化了Cu2+的亲和层析柱去除切除的融合标签。 ■ 八种人趋化因子（Magis-trelli 2005）——所有的蛋白都在OrigamiTM B菌株中表达提高它们在胞质中的二硫键形成率。在趋化因子编码序列的C端引入了AviTMTag（亲和素）生物素化序列。切割后的细胞趋化因子可以用单体的亲和素树脂亲和层析与切割下的NusA标签和蛋白酶混合物分离开。所有切割纯化后的蛋白在细胞趋化实验中都显示了活性，而没有一个融合蛋白有这样的活性
两个不发光的片段，分别与待测蛋白A和B融合。 ◆ BiFC系统包含两个质粒，一个质粒上带有到YFP蛋白的N端1-173个氨基酸 （YN173），另一个质粒上保留YFP蛋白C端155-238位（YC155）；此设计可以增强弱互作蛋白的荧光信号。将待测蛋白A和B分别构建到两个载体上。 ◆ 载体上分别带有Myc标签和HA标签，可供WB验证。 ◆将待测蛋白A和B分别构建到两个载体上，与YFP的N部分和C部分分别融合表达，如果A和B蛋白能够结合，则YFP的两个部分也能重新组合在一起发出荧光。 简单说：有荧光
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