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- 百奥莱博
- BTN91202-QSU
- 北京
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
454
- 英文名：
Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
低温运输，-20℃
- 规格：
50次
特别提示：包括双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)
英文名称：Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit
产品货号：BTN91202
产品规格：50次
本产品是经过精心优化的、基于MMLV 逆转录酶和Taq DNA聚合酶的双酶一管式RT-PCR试剂盒，它含有除模版RNA和其专一性引物以外的所有RT-PCR试剂，包括MMLV 逆转录酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR缓冲液等，可以在同一反应管内完成RNA→cDNA→PCR反应(RT-PCR反应)。
产品特点：
1.一管式完成RT-PCR反应，避免样品交叉污染。
2. 即开即用，用户不需要单独准备RT-PCR所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix，将加样步骤减少到zuì低，极大降低了加样误差，增加了可重复性。
4. 使用范围广，适用于从病毒RNA 到人RNA的各种RNA 模板。
5.高灵敏度，每个RT-PCR 体系zuì低可以检测200拷贝的RNA分子，可扩增的模版RNA的zuì长达2000nt。
6. 所得RT-PCR产物可以直接用于AT克隆。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| 双酶一管式RT-PCR Buffer(2×) | 750μl |
| MMLV-Taq Mix | 100μl |
| RNase-free水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
注意：所有离心管用前zuì好全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个30μL 体系的RT-PCR 为例，如果体积不同，各成分用量需要适当调节。
1.在一干净的无RNase的PCR管中，先加入下列成分：
| 成分 | 阴性对照 | 样品 |
| RNA模板(自备，分下面三种情况) | 无 | 见下 |
| 总RNA | 无 | 100-500ng |
| 或poly(A)mRNA | 无 | 10-500ng |
| 或体外转录得到的专一RNA | 无 | 0.01 pg-500ng |
| RNA特异性引物一(自备) | 终浓度300nM | 终浓度300nM |
| RNA特异性引物二(自备) | 终浓度300nM | 终浓度300nM |
| 探针(仅对Realtime RT-PCR) | 终浓度200nM | 终浓度200nM |
| RNase-free水 | 补到13μL | 补到13μL |
| 双酶一管式RT-PCR Buffer(2×) | 15μl | 15μl |
| MMLV-Taq Mix | 2μl | 2μl |
注：通常初次使用本试剂时，可用引物浓度300nM，探针浓度200nM进行实验，根据实验结果具体情况，在200～800nM 范围内调整引物浓度，在50～400nM 范围内调整探针浓度以达到zuì佳检测效果。引物、探针、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整，同时增减DEPC 水用量，保证总反应体积不变即可。
2. 轻柔混合均匀后放入PCR 仪中进行RT-PCR。
3. 设定RT-PCR反应条件时，一般将RT的条件设定成42℃，30 钟，后接94℃变性5分钟，然后进入PCR循环(PCR参数将根据自备引物的Tm 值由用户自行决定注)、zuì后72℃，5分钟。对Realtime PCR，在复性步骤设置荧光检测，检测通道：FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR结束后取5-10μL电泳检查。
注意事项：
1. 使用已校准的移液器，选用一次性PCR反应管、离心管、tip 头等进行样本处理及配液等操作，所有用具应不含DNA酶和RNA酶。
2.引物、探针设计过程中应尽可能避免发夹结构、二聚体等现象的发生，探针的位置尽可能靠近上游引物，PCR 目标片段zuì好小于200bp，尽可能在150bp以内。
3. 实验样品尽可能新鲜，提取过程应严防RNA酶污染及操作不当导致的RNA 降解。
4. 使用本产品时建议对RT-PCR扩增条件、引物浓度和样品用量进行调整，选择zuì适当的引物浓度、样品浓度和PCR扩增条件。
5. 本产品使用前应在室温充分融解，并用漩涡震荡器充分混匀。
6. 统一配液后分装以减少加样误差，每次实验应设置阴性对照。
7. 禁止标记PCR反应管，避免外源性荧光信号干扰。
8. PCR反应管中不能有气泡，否则会产生非特异的荧光信号。若有气泡，可先用手指将气泡弹破，然后再低速离心消除。
9. 实时荧光PCR 仪器连续进行实验时，zuì好间隔一小时以上再使用。
10. 实时荧光PCR 仪需经常校正和清洁载样板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM荧光PCR 仪，应将毛细管放在专门套管中，以便分装反应体系和加入待检样品。前述操作完毕应低速离心数秒再将毛细管垂直缓慢放入样品架，以免折断；若发生折断，应小心取出，用专用小毛刷擦拭干净后方可进行扩增。
12. 实验室应严格分区，避免PCR产物污染。
我公司销售的双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)，Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验for both DNA sample and reaction mixture preparation, is strongly recommended.The reagents for PCR should be prepared separately and used solely for this purpose. Autoclaving of all solutions, except dNTPs, primers and Taq DNA Polymerase is recommended
DNA聚合酶Taq Plus和 Taq Plus I 有什么区别吗？对PCR结果有影响吗？ Taq Plus 集扩增效率高和保真度好于一体。能有效地扩增10 kb以下的片段，扩增效率比Pfu高，保真度 Taq Plus 比Taq好。对于有些结构复杂的模板，如GC含量高、有二级结构等可选用Taq Plus扩增。 Taq
This is a protocol from Engelke et.al.(1990)which was modified by Dr.Baron.The enzyme has been used for RT-PCR,genotyping and cloning.Solutions1000X IPTG0.5M IPTG 1.19g IPTGup to 10 ml wih sterile Qfilter and store at -20℃Buffer A50 mM Tris 7.9 25
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