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EZ-Blunt Simple
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EZ-Blunt Simple Zero pTOPO Cloning Kit
一年
上海信裕生物科技有限公司
−20℃恒温保存一年。
20 rxn
【产品概述】
本产品不同于使用T4 DNA 连接酶的传统克隆方法,而是采用拓扑异构酶Ⅰ(TopoisomeraseⅠ),可短时间内(几秒钟-几分钟)高效连接DNA片段。连接产物转化大肠杆菌时,无需冰浴和热激,室温5分钟内完成转化,转化后大肠杆菌37℃复苏10分钟即可涂板。有效连接片段可长达10 kb。此外,本产品无自连、零背景,无需蓝白斑筛选,阳性克隆比例很高,极少出现空载体,是简单、快速、零背景免筛选的TOPO 平末端克隆载体。
本产品在克隆插入位点两侧不含多克隆酶切位点,需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行酶切时,与含多克隆位点的T载体不同,酶切反应将不受T载体上其它酶切位点上的影响,增加了成功率。
测序可以采用M13F/M13R通用引物测序(见下页质粒图谱)。
pTOPO-BluntSimple载体图谱:
pTOPO-Blunt Simple载体通用测序引物序列: M13F: TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R: CAGGAAACAGCTATGACC
pTOPO-Blunt Simple载体多克隆位点序列:
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