EZ-Blunt Simple Zero pTOPO Clo

EZ-Blunt Simple Zero pTOPO Cloning Kit

【产品概述】

本产品不同于使用T4 DNA 连接酶的传统克隆方法，而是采用拓扑异构酶Ⅰ（TopoisomeraseⅠ），可短时间内（几秒钟-几分钟）高效连接DNA片段。连接产物转化大肠杆菌时，无需冰浴和热激，室温5分钟内完成转化，转化后大肠杆菌37℃复苏10分钟即可涂板。有效连接片段可长达10 kb。此外，本产品无自连、零背景，无需蓝白斑筛选，阳性克隆比例很高，极少出现空载体，是简单、快速、零背景免筛选的TOPO 平末端克隆载体。

本产品在克隆插入位点两侧不含多克隆酶切位点，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行酶切时，与含多克隆位点的T载体不同，酶切反应将不受T载体上其它酶切位点上的影响，增加了成功率。

测序可以采用M13F/M13R通用引物测序（见下页质粒图谱）。

pTOPO-BluntSimple载体图谱：

 

 

pTOPO-Blunt Simple载体通用测序引物序列：        M13F: TGTAAAACGACGGCCAGT

M13R: CAGGAAACAGCTATGACC

 

pTOPO-Blunt Simple载体多克隆位点序列：

【产品组分】

 

pTOPO-Blunt Simple Vector（30ng/μl）	20 μl
1 kb Control（30ng/μl）	5 μl
10 x Enhancer	20 μl

【保存、运输条件】

 

−20℃恒温保存一年。