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- roche
- 10881775001
- 2025年11月20日
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- 英文名：
RNA Polymerase, T7
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- 供应商：
嵘崴达
- 保存条件：
−20°C
- 规格：
5000 UNITS
T7 RNA 聚合酶
from Escherichia coli BL 21/pAR 1219
别名:
polymerase
一般描述
T7 RNA 聚合酶通常用于转录DNA，这些 DNA 已经克隆到具有两个相反方向的噬菌体启动子的载体中。可以使用不同的聚合酶，从插入 DNA 的任一链，选择性地合成 RNA。使用该系统可以产生同源标记的单链 RNA。转录物可以用生物素或 DIG-11-UTP 进行非放射性标记，或用 [α-32P] 或 [α-35S] 标记的核苷酸放射性标记至高比活性。
杂交探针的合成：T7 RNA 聚合酶能高效生产均一标记的 RNA。该标记的 RNA 可用作 Southern、Northern 和斑点印迹中的杂交探针，以及原位杂交。
合适的标记：转录物可以用生物素-16-UTP 或 DIG-11-UTP 进行非放射性标记。它们也可以用 [α-32P]- 或 [α-35S] 标记的核苷酸放射性标记为高比活性。
特异性
启动子特异性
T7 RNA 聚合酶具有极高的启动子特异性，仅转录噬菌体 T7 DNA 或克隆到T7 启动子下游的 DNA。尽管 T7 和 T3 启动子序列仅相差 3bp，但 T7 RNA 聚合酶仅转录克隆到其启动子下游的DNA。
热灭火：通过加入 2 μl 0.2MEDTA（pH8.0）和/或加热至 65℃ 来终止反应。
应用
- T7 RNA 聚合酶可以转录来自 T7 启动子下游的克隆 DNA 模板的 RNA。可以用标记的 NTP 进行合成以产生高度标记的 RNA。合成的 RNA 有多种应用，包括：RNA 或 DNA 印迹技术
- 原位杂交
- RNA 酶保护研究：由酶合成的转录物可用作 RNA 剪接和加工研究的前体 RNA。
- 通过在转录反应期间加入 m7GpppG 或 m7GpppA 超过 GTP 或 ATP，以在体外合成加帽的 RNA。可以将产生的反义 RNA 引入细胞中，以抑制相应基因的表达。
- 微阵列靶标合成
包装
1个试剂盒包含2个组分
| 10881775001 | RNA Polymerase, T7, 5000 U T7 RNA聚合酶 | 5,000 U |
| 11031171001 | RNA Polymerase, T3, 5000 U T3 RNA聚合酶 | 5,000 U |
| 3353575910 | DIG Oligo 3'-End Lab. Kit,2nd | 1 kit (25 labeling reactions) |
| 10481238001 | pBR322 DNA (1 A260 unit) | 200 µl (1 A260 unit) |
| 11388908910 | Biotin-16-UTP | 250 nmol (25 µl) |
| 11745816910 | DIG-Nick translat.mix f.in sit | 160 µl (for 40 labeling reactions) |
| 11093274910 | Anti-digoxigenin AP-conjungate | 150 U (200 µl) |
| 10885819001 | pUC18 DNA | 50 µg (200 µl) |
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文献和实验一般是指 DNA依存性 RNA聚合酶。是催化以 DNA为模板（ template）、三磷酸核糖核苷为底物、通过磷酸二酯键而聚合的合成 RNA的酶。因为在细胞内与基因 DNA的遗传信息转录为 RNA有关，所以也称转录酶。反应以下式示： n1 -n4 表示各个模板的 DNA链的胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘧啶、腺嘌呤的碱基数。通过特异的碱基配对的形成，合成具有与模板 DNA链完全互补的碱基排列的 RNA。反应是由（ 1） DNA与酶的结合
，则可计算其直径约为100A，即约为双链DNA的30bp节段的长度。然而全酶可结合约60个核苷酸 ，提示其形状应为椭圆球形。 结构 为什么细菌 的RNA聚合酶需要这么大和复杂的分子结构呢?而某些噬菌体特有的RNA聚合酶则要小得多，仅由一条多肽链组成。这证明RNA合成所需的机构可以远比宿主的酶小。这种情况说明，噬菌体内的转录仅需一条"最小"的机构。然而这种酶只能识别噬菌体本身所有的少数几个启动子;它们不能识别其他启动子。例如噬菌体T3和T7的RNA聚合酶分子很相似
mRNA Amplification with T7 RNA Polymerase
on a 42ºC oven and set PCR machine to hold at 70ºC. In an Eppendorf tube add: 1 µg Total RNA 1 µL T7 oligo(dT) primer q.s. to 12 µL with Nuclease-free H2 O Incubate 10 min. at 70ºC. Spin briefly to pull
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