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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称:
重组蛋白表达
- 提供商:
福因德科技(武汉)有限公司
可以根据客户需求:选择不同的标签蛋白、抗性、表达元件和表达宿主。
原核表达特色:
- 蛋白可溶性表达;
- 活性蛋白表达;
- 用于蛋白质互作研究的蛋白表达;
- 蛋白质成功复性;
- 原核表达优势:
- 根据客户序列信息,Frdbio进行基因优化分析:mRNA、密码子偏爱性等多维度优化。2. 多种表达载体和宿主菌供选择。
| 服务内容 | 价格 | 周期 | 交付标准 | 备注 | |
| 基因优化合成 | 市场优惠时价 | 含合成基因质粒和克隆菌 | |||
| 蛋白表达 | *验证测试 | 500元 | 5个工作日 | 含目的基因的表达质粒+克隆菌株+表达菌株 | |
| *表达保证型 | 2000元 | 10个工作日 | 不成功不收费 | ||
| *上清保证型 | 4500元 | 15个工作日 | |||
| 蛋白纯化 | 1-3mg蛋白,纯度>85% | 根据蛋白难度协商定价 | 5个工作日 | ||
| 3-5mg蛋白,纯度>85% | 5个工作日 | ||||
| 5-10mg蛋白,纯度>85% | 10个工作日 | ||||
表达保证型:由Frdbio设计表达方案,表达目的蛋白的全长或者部分片段;
上清保证型:由Frdbio设计表达方案,表达目的蛋白的全长或者部分片段,并且保证其表达状态为上清可溶。
哺乳动物细胞蛋白表达
Frdbio配套的cDNA基因文库、自主知识产权的pFrd系列载体以及医药研发级别的工程细胞系,提高蛋白表达的成功率和产量。Frdbio可提供瞬转HEK293细胞和稳转CHO细胞系
| 服务名称 | 服务内容 | 周期 |
| 表达系统选择 | 自主知识产权的优化表达载体Frdbio系列,自主驯化高表达量293和CHO细胞 | |
| 表达载体构建 | 基因优化及合成,亚克隆到真核表达载体无内毒素质粒抽提。 | 2-4周 |
| 瞬转小试 | 细胞顺转,表达小试,表达分析鉴定 | 2-3周 |
| 表达纯化 | 表达条件优化、SDS-PAGE/WB分析鉴定、最优条件80ml扩大及纯化测试、标签去除测试(可选)。 | 2-4周 |
| 大规模发酵与纯化 | 无内毒素质粒大提、质粒质控及瞬时转染、蛋白亲和纯化(或其他纯化方式)、蛋白buffer置换浓缩、蛋白SDS-PAGE/WB 鉴定、MS鉴定(可选)。 |
*不同蛋白表达差异较大,我们尽可能在小试阶段尽可能多提供蛋白以满足您的蛋白需求。
*正我们使用标签(His,HA,cMyc)特异性抗体检测蛋白是否表达;
*如果选择不带标签表达,后期纯化费用会非常高,且需要提供蛋白特异性抗体用于检测蛋白。
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文献和实验QIAgene Expression Kit——再也不为重组蛋白的表达效率发愁 据Protein Database的最新数据表明,目前已知的人类蛋白有35,000种(包括splice variants),大约33%的蛋白正处于研究中,但是只有8%的蛋白能够成功表达。统计数据同时显示,目前克隆,表达,纯化的成功率只维持在54%,74%,59%。所以说,在蛋白表达的漫漫征途中,拿不到想要的蛋白是一件非常普遍的事情。举一个例子来说对于目标蛋白不表达或表达量低这个常见问题,需要排除或检查的因素就太多
蓝 20 % 甘油 实验方案: 1、外源基因的诱导表达: (1)用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA 和目的基因. ( 2 )按连接步骤连接目的基因和载体,并转化到相应的宿主菌. ( 3 )筛选出含重组子的转化菌落,提取质粒DNA 作限制性内切核酸酶图谱,DNA 序列测定, 确定无误后进行下一步. ( 4 )如果表达载体的原核启动子为PL 启动子,则在30 -32 ℃ 培养数小时,使培养液的OD600达0.4-0.6 ,迅速使温度升至42
[ 实验目的 ] 通过本实验学习 PCR 反应的基本原理与实验技术。 通过本实验学习重组质粒的检测技术。 [ 基本原理 ] 聚合酶链反应( polymerase chain reaction , PCR )是体外酶促合成特异 DNA 片段的一种技术。在待扩增的 DNA 片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后, DNA 扩增 2 n 倍。 PCR 进行的基本条件是: ( 1 )以 DNA 为模板(在 RT - PCR 中模板是 RNA ); ( 2 )以寡核苷酸
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