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- 2025年07月13日
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文献和实验1. 提取液制备：
每400ul冷的蛋白提取液A/B/D中都分别加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，800×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×106个细胞中加入400ul冷的蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下用试剂盒所配针筒反复吸吹细胞，使细胞完全破裂。
5. 在4℃，1000×g条件下离心5分钟。
6. 将上清（I）吸入另一干净离心管，在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒，充分混匀。
7. 将混匀的提取液B置4℃低速振荡30-40分钟。
8. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
9. 在步骤6中所得到的上清（I）中加入8ul提取液C，充分混匀。
10. 在2-8℃振荡20-30分钟。
11. 在37℃水浴10分钟。
12. 在37℃下 1000g离心3分钟，此时溶液分为两层，上层是胞浆蛋白部分，下层部分（II）是膜蛋白约为40-50μl。
13. 将上层小心吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
14. 用50-100μl冰冷的提取液D溶解步骤12中的下层部分（II），即得膜蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
细胞核蛋白质提取试剂盒 Nucleoprotein Protein Extraction Kit 产品说明：本试剂盒提供独特的组份，采用特殊的非离子型去污剂，以及焦磷酸钠等数种蛋白磷酸酶和蛋白酶抑制试剂，能够在非变性和低渗的条件下裂解细胞，经过洗涤去除大部分胞质蛋白和膜蛋白，释放的细胞核能够保持完整，再用Lysis Buffer对细胞核蛋白质进行抽提的同时可以保持核蛋白质的活性，因此该产品可合适用于SDS-PAGE电泳、Western Blot、免疫共沉淀，EMSA
：主要由微滴板载盒、滑板、传动带、滑轨和走板电机等组成。磁力传动可提高整机的密封性，微滴板载盒与其驱动机构之间由机壳左部的导板完全隔离。在磁力作用下，微滴板载盒在机壳左部的导板内来回运动，完成微滴板载盒的进退功能。 （3）压力和真空单元：主要由真空／压力泵、真空管路、压力管路、电磁阀、洗液瓶和废液瓶等组成。 （4）电源开关、处理器控制单元及外设：电源开关为电磁阀、升降电机，提供直流电源。处理器系统由单片机、程序存储器、数据存储器及相应的锁存译码芯片构成，通过I／O接口来控制键盘和显示屏等外设
992)样本：人 HeLa 细胞 (Fig.6)A. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉和 0.15 M NaClB. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉和 0.5 M NaClFig.6我们为您推荐实验设计数据参考：裂解缓冲液蛋白定位裂解液推荐试剂盒全细胞NP-40 or RIPA全蛋白抽提试剂盒细胞质（可溶蛋白）Tris-HCl胞浆蛋白和核蛋白抽提试剂盒线粒体蛋白提取试剂盒细胞质（细胞骨架 等不溶蛋白）Tris
