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1年
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北京百奥莱博科技有限公司
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-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")小鼠CCL21重组蛋白销*(代"售"),我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:小鼠CCL21重组蛋白销*(代"售")
编号:ZN1743
规格:100ng
品牌:百奥莱博
产地:北京
来源:大肠杆菌
特异性:小鼠
应用:WB阳性对照
形态:冻干粉
纯度:>98%,RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件:-20℃保存1年以上,避免反复冻融。
关于小鼠CCL21重组蛋白销*(代"售")的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·小鼠内皮细胞特异性分子1(Endo*(代"c")an)检测试剂盒
编号:ZN2606
英文名称:Mouse Endothelial cell-specific molecule 1 ELISA Kit
规格:96T
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法,用于体外定量分析小鼠血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清中Endo*(代"c")an的含量。预先包被的抗体为Endo*(代"c")an单克隆抗体。检测相抗体为Endo*(代"c")an单克隆抗体,经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Endo*(代"c")an呈正相关。
Endo*(代"c")an又被称为ESM-1,是内皮细胞特异性分子1主要在肺、肾血管内皮细胞中表达的内皮细胞分子。
检测指标:ESM-1;Esm1;Endo*(代"c")an
检测范围:23.4pg/ml~1500pg/ml
特异性:系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性:<2pg/ml
产品组成:
| 组分 | 规格 | 数量 |
| 预包被抗小鼠Endo*(代"c")an抗体的96孔板 | 96T | 1板 |
| 重组小鼠Endo*(代"c")an标准品(冻干) | 10ng/管 | 2管 |
| 生物素标记抗小鼠Endo*(代"c")an(100X) | 130μl | 1管 |
| 亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X) | 130μl | 1管 |
| 样品稀释液 | 30ml | 1瓶 |
| 抗体稀释液 | 12ml | 1瓶 |
| ABC稀释液 | 12ml | 1瓶 |
| TMB显色液 | 10ml | 1瓶 |
| TMB终止液 | 10ml | 1瓶 |
| 洗涤缓冲液(25X) | 20ml | 1瓶 |
| 封板膜 | 4张 |
储存条件:2-8℃(频繁使用时),-20℃(长时间不用时)
有效期: 6个月(4℃);12个月(-20℃)
参考标准曲线数据:(取自某一批次质检数据,仅供参考,用户需要自己建立标准曲线)
| 浓度(pg/ml) | 0 | 23.4 | 46.8 | 93.7 | 187.5 | 375 | 750 | 1500 |
| OD值 | 0.104 | 0.172 | 0.213 | 0.261 | 0.411 | 0.903 | 1.135 | 1.714 |
小鼠CCL21重组蛋白销*(代"售")关键词:ZN1743,百奥莱博,小鼠CCL21重组蛋白
·细胞凋亡检测试剂盒V(POD)
编号:ZN1529
规格:100T
保存条件:-20℃冰冻保存一年。
工作原理:
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡,其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚,时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活
,细胞自身的染色质或DNA被切割,出现单链或双链缺口,并产生与DNA断点数目相同的3’-OH末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将Digoxin标记的
dUTP(DIG-dUTP)标记至3’-OH末端,DIG-dUTP结合在DNA断点部位,可以通过生物标记的抗Digoxin抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后,再结合链酶亲和素-过氧化物酶(SABC),然后加入显色底物
DAB予以显示。凋亡的细包核呈黄色,从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。
试剂盒内容:
1.标记缓冲液(Labeling Buffer)5ml
2.末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)100μl
3.DIG-dUTP(×20)100μl
4.封闭液(Blocking Reagent)20ml
5.生物素化抗Digoxin抗体(×100)100μl
6.SABC(×100)100μl
7.Proteinase K(×200)250μl
8.抗体稀释液20ml
阳性对照片2张
用户自备试剂:
1.多聚赖*酸或APES。
2.0.01M TBS,调pH 7.5(配法:1L双蒸馏水中加入8.5克*化*,1.2克Tris,用纯乙酸或盐*(代"酸")调pH。)
3.DAB显色试剂盒,也可自配显色剂。
操作步骤:
1.样品处理
(1)玻片预先用多聚赖*酸或APES进行处理。
(2)细胞涂片和冰冻切片:最重要的是及时固定。用4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0---7.6)室温下固定30—60分钟。0.01M PBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤2分钟×2次。
(3)组织:有条件时应及时固定。常规4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0---7.6)或10%中性缓冲福尔马林固定4小时以上,石蜡包埋。切片常规脱蜡入水(脱蜡务必干净)。
2.新鲜配制3%H2O2,室温处理10分钟。蒸馏水洗涤2分钟×3次。
3.标本片加0.01M TBS 1:200新鲜稀释Proteinase K 37℃消化1—15分钟,0.01M TBS洗2分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或消化10—60秒钟。新鲜石蜡切片消化5-10
分钟。陈旧石蜡切片消化10-15分钟)。
4.标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer)20μl/片,以保持切片湿润。然后按每张切片取TdT和DIG-d-UTP各1μl ,加入到18μl标记缓冲液中,混匀。甩去切片上多余液体后加
混合好标记液,20μl/片。置样品于湿盒中,37℃标记2小时。
5.0.01M TBS洗2分钟×3次。
6.加封闭液50μl/片,室温30分钟,甩掉封闭液,不洗。
7.用抗体稀释液1:100稀释生物素化抗Digoxin抗体:(取1ml抗体稀释液加生物素化抗Digoxin抗体10μl),混匀后50μl/片加至标本片上。置样品于湿盒中,37℃反应30分钟。
0.01M TBS洗2分钟×3次。
8.用抗体稀释液1:100稀释SABC:取1ml抗体稀释液加SABC 10μl,混匀后50μl/片加至切片。37℃反应30分钟。0.01M TBS洗5分钟×4次。
9.DAB显色:取1ml蒸馏水,分别加入DAB试剂盒中A,B,C试剂各一滴,混匀后加至标本片上,显色10-30分钟左右。水洗。
10.苏木素轻度复染。0.01M TBS洗,蒸馏水洗。脱水,透明,封片。显微镜观察。
结果判定:
细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞,即凋亡的细胞。
注意事项:
1.试剂盒严格-20℃存放。
2.初用时如试管底部无可见的试剂,在离心机离心5分钟,使试剂沉至管底。
3.检测过程中切勿使样品干涸。
小鼠CCL21重组蛋白销*(代"售")关键词:ZN1743,百奥莱博,小鼠CCL21重组蛋白
·PSCA mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN1188
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:human
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液2ml;
3.PSCA mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml;
4.封闭液5ml;
5.生物素化鼠抗Digoxin5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxin:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
PSCA的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
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