ATF6 mRNA原位杂交试剂盒厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖ATF6 mRNA原位杂交试剂盒厂家在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：ATF6 mRNA原位杂交试剂盒厂家
编号：ZN0103
规格：100T
品牌：百奥莱博
产地：北京
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：rat
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液2ml；
3.ATF6 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml；
4.封闭液5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxin5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxin：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
ATF6的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

除ATF6 mRNA原位杂交试剂盒厂家外，我公司正在打折促销以下产品：

·抗原修复液I
编号：ZN1954
规格：12ml
使用说明：组化实验中的抗原修复。将修复液覆盖组织，修复时间视组织而定。

·人P53重组蛋白
编号：ZN1695
规格：100ng
来源：大肠杆菌
特异性：人
应用：WB阳性对照
形态：冻干粉
纯度：>98%，RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件：-20℃保存1年以上，避免反复冻融。

·人载脂蛋白E(APOE)ELISA试剂盒
编号：ZN2029
英文名称：Human Apolipoprotein E ELISA Kit
规格：96T
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法，用于体外定量分析人血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清、唾液、母乳或尿液中APOE的含量。预先包被的APOE抗体和检测相抗体都是多克隆抗体。检测相抗体经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人APOE呈正相关。

载脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)是一种多态性蛋白，参与脂蛋白的转化与代谢过程，其基因可以调节许多生物学功能，与许多眼科疾病发病有关。载脂蛋白E主要存在于CM、VLDL、IDL和部分HDL中， ApoE的浓度与血浆甘油三酯含量呈正相关。

检测指标：Apolipoprotein E；Apo-E；APOE
检测范围：3.12ng/ml～200ng/ml
特异性：系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性：＜50pg/ml

产品组成：

 

组分	规格	数量
预包被抗人APOE抗体的96孔板	96T	1板
重组人APOE标准品(冻干)	200ng/管	2管
生物素标记抗人APOE(100X)	130μl	1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)	130μl	1管
样品稀释液	30ml	1瓶
抗体稀释液	12ml	1瓶
ABC稀释液	12ml	1瓶
TMB显色液	10ml	1瓶
TMB终止液	10ml	1瓶
洗涤缓冲液(25X)	20ml	1瓶
封板膜		4张

储存条件：2-8℃（频繁使用时），-20℃（长时间不用时）。
有效期：6个月(4℃)；12个月（-20℃）。

参考标准曲线数据：(取自某一批次质检数据，仅供参考，用户需要自己建立标准曲线)

浓度(ng/ml)	0	3.12	6.25	12.5	25	50	100	200
OD值	0.010	0.073	0.138	0.243	0.484	0.907	1.475	2.204

ATF6 mRNA原位杂交试剂盒厂家关键词：ATF6 mRNA原位杂交试剂盒,ZN0103,百奥莱博


·人天冬酰胺内肽酶(Legumain)检测试剂盒(ELISA方法)
编号：ZN2299
英文名称：Human Legumain ELISA Kit
规格：96T
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法，用于体外定量分析人血清、血浆、细胞裂解液或细胞培养上清中Legumain的含量。预先包被的抗体为Legumain多克隆抗体。检测相抗体为Legumain单克隆抗体，经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Legumain呈正相关。

Legumain又称天冬酰胺内肽酶(asparaginyl endopeptidase,AEP)，是一种溶酶体半胱*酸蛋白酶，属于半胱*酸蛋白酶C13家族的新成员。最初是在豆类植物种子中发现的。随后在人体也发现了Legumain，其基因定位于14号染色体。研究表明，Legumain作为一种应激反应蛋白，只在特定条件下表达。在哺乳类动物具有抗凋亡作用，在炎性反应过程中起抗原呈递作用。在多种实体瘤、肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、肿瘤新生血管的内皮细胞中高表达，与恶性肿瘤的血管生成、肿瘤侵袭、扩散和转移密切相关,是近年来备受关注的一类靶标蛋白酶。对Legumain的深入研究将有利于阐明恶性实体瘤的发病机制，明确其作为肿瘤基因治疗新靶标的有效性。

检测指标：Legumain；LGMN；天冬酰胺內肽酶；AEP；半胱*酸蛋白酶legumain
检测范围：31.2pg/ml～2000pg/ml
特异性：系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性：＜4pg/ml

产品组成：

组分	规格	数量
预包被抗人Legumain抗体的96孔板	96T	1板
重组人Legumain标准品(冻干)	10ng/管	2管
生物素标记抗人Legumain(100X)	130μl	1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)	130μl	1管
样品稀释液	30ml	1瓶
抗体稀释液	12ml	1瓶
ABC稀释液	12ml	1瓶
TMB显色液	10ml	1瓶
TMB终止液	10ml	1瓶
洗涤缓冲液(25X)	20ml	1瓶
封板膜		4张

储存条件：2-8℃（频繁使用时），-20℃（长时间不用时）。
有效期：6个月(4℃)；12个月（-20℃）。

参考标准曲线数据：(取自某一批次质检数据，仅供参考，用户需要自己建立标准曲线)

浓度(pg/ml)	0	31.2	62.5	125	250	500	1000	2000
OD值	0.007	0.151	0.203	0.307	0.508	0.871	1.413	1.988

ATF6 mRNA原位杂交试剂盒厂家关键词：ATF6 mRNA原位杂交试剂盒,ZN0103,百奥莱博

ALH371 改良BCA法蛋白定量试剂盒 Protein Quantitation Kit By BCA
YT578 头孢菌素C脱乙酰酶 Cephalosporin-C Deacetylase (Crude Enzyme)
WE0305 丽春红染色试剂 Ponceau Stain Reagent 
BTN61202 一步式复杂样品DNA提取试剂盒 One-step DNA extraction kit
SV1334 E coli RNA 聚合酶, 全酶
YT166 甲基绿染色液 Methyl Green Staining Solution
KFS250 活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒(AO/EB法.荧光显微镜) Normal/Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit
SY0489 JC-1线粒体膜电位检测试剂盒 JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit
SV0468 MfeI-HF限制性内切酶 MfeI-HF Restriction Endonuclease
WE0156 BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(高含量ROX校正染料) BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG)(High ROX)
HR0418 JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 JC-10 mitochondrial membrane potential detection kit
SY0128 FXR-Luc荧光素酶报告基因质粒 FXR Luciferase Reporter Plasmid
BTN111205 DNA洗脱液2.0
BTN160101 pUCm-T载体 pUCm-T vector
ALH029 细菌RNA提取试剂盒(柱式吸附去除DNA) Bacterial total RNA Extraction Kit
YT419 YT DNA上样缓冲液(6X) YT 6×DNA loading buffer
BTN100836 亮抑蛋白酶胎溶液(10mg/mL) Leupeptin Solution
BTN3190 水饱和酚 Water-Saturated Phenol
SV1058 无机焦磷酸酶（E coli） Coli E (inorganic)

北京百莱博科技有限公司是基因结构和功能产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购ATF6 mRNA原位杂交试剂盒厂家。