北京现货PRODH mRNA原位杂交试剂盒怎么卖

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名称：北京现货PRODH mRNA原位杂交试剂盒怎么卖
编号：ZN1178
规格：100T
品牌：百奥莱博
产地：北京
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：human
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液2ml；
3.PRODH mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml；
4.封闭液5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxin5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxin：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
PRODH的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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SV0667 SapI限制性内切酶 SapI Restriction Endonuclease
WE0224 RNase A溶液(10mg/ml) RNase A(10mg/ml)
HR0527 支原体预防试剂 Mycoplasma prevention reagents
SY0195 SMAD-GFP报告基因质粒 SMAD GFP Reporter Plasmid
RFT031 PCR产物纯化试剂盒 PCR product purification kit
KFS169 Ca2+ GPCR分析-*离子指示探针 Fluo-4, AM Fluo-4, AM
ALH096 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 Agarose gel DNA Recovery Kit
YT540 葡萄糖脱*酶 Glucose Dehydrogenase (Crude Enzyme)
BTN131116 pNPP干粉 p-nitrophenyl phosphate,disodiu*(代"m") salt
BTN130831 丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒 Filamentous fungal mitochondria DNA extraction kit
SV1192 β-琼脂糖酶 I
YT128 增强型CCK-8试剂盒 Enhanced Cell Counting Kit-8
BTN130920 dITP溶液(100mM) dITP Solution(100mM)
SY0453 牛血清白蛋白(无DNase、蛋白酶、IgG) BSA, DNase、Protease、IgG Free
SV0360 EcoRV-HF限制性内切酶 EcoRV-HF Restriction Endonuclease
WE0120 血液直接PCR扩增试剂盒 Blood Direct PCR Kit
BTN111202 非冻型血液RNA保存液 RNAhold Blood RNA non-freezing preservation solution
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·人白介素23受体(IL-23R)检测试剂盒(ELISA方法)
编号：ZN2259
英文名称：Human Interleukin-23 receptor ELISA Kit
规格：96T
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法，用于体外定量分析人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液或细胞培养上清
中IL-23R的含量。预先包被的抗体和检测相克隆抗体都是亲和纯化的IL-23R多克隆抗体。检测相抗体经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人IL-23R呈正相关。

检测指标：L-23 receptor；IL-23R；IL23R
检测范围：156pg/ml～10,000pg/ml
特异性：系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性：＜10pg/ml

产品组成：

 

组分	规格	数量
预包被抗人IL-23R抗体的96孔板	96T	1板
重组人IL-23R标准品(冻干)	10ng/管	2管
生物素标记抗人IL-23R(100X)	130μl	1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)	130μl	1管
样品稀释液	30ml	1瓶
抗体稀释液	12ml	1瓶
ABC稀释液	12ml	1瓶
TMB显色液	10ml	1瓶
TMB终止液	10ml	1瓶
洗涤缓冲液(25X)	20ml	1瓶
封板膜		4张

储存条件：2-8℃（频繁使用时），-20℃（长时间不用时）。
有效期：6个月(4℃)；12个月（-20℃）。

参考标准曲线数据：(取自某一批次质检数据，仅供参考，用户需要自己建立标准曲线)

浓度(pg/ml)	0	156	312	625	1250	2500	5000	10000
OD值	0.090	0.178	0.271	0.412	0.674	1.034	1.418	1.815

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SV0993 acyNTP 套装
YT028 快速DNA连接试剂盒 Rapid DNA Ligation Kit
BTN70503Z DNA marker(300-10000bp) DNA ladder(300-10000bp)
SV1435 E. coli 核糖体
SV0089 BamHI-HF限制性内切酶 BamHI-HF Restriction Endonuclease
KFS312 一氧化*(代"氮")合成酶检测试剂盒(荧光法) Nitric Oxide Synthase Assay Kit
SY0554 细胞膜可渗透*离子荧光探针 Fluo-4, AM, Cell Permeant
YT930 EZH2抑制剂(E7438) EPZ-6438
BTN130657 热稳定无机焦磷酸酶(PPase) Inorganic Pyrophosphatase，Thermostable
HR0520 胰蛋白酶-碳酸*铵溶液(0.25%:0.2%) Trypsin ammonium bicarbonate solution (0.25%: 0.2%)
SY0190 Oct4-GFP报告基因质粒 Oct4 GFP Reporter Plasmid
YT275 eNOS抑制剂(L-NAME)(内皮型一氧化*(代"氮")合酶抑制剂) eNOS Inhibitor(L-NAME)
BTN140389 酿酒酵母Y187感受态细胞 E.coli Y187 Rosetta Competent Cell
ALH088 柱式质粒大量提取试剂盒 A large number of Plasmid Extraction Kit (centrifugal column type)
YT533 仲醇脱*酶 Secondary Alcohol Dehydrogenase (Crude Enzyme)
WE0263 酵母蛋白抽提试剂盒 Yeast Proein Extraction Kit
BTN100932 溶壁酶干粉(破壁酶) Lywallzyme,powder
SV1183 M13mp18 RF I DNA

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