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366
- 保质期:
6个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
4℃保存,6个月有效。产品说明:Western blotting 专用一抗二抗稀释液适用于蛋白印迹时一抗和二抗的稀释。本产品的主要有效成分为经过反复优化的适量 BSA、适当的去垢剂和一抗稳定试剂等,能有效减少一抗的非特异性结合,有效提升稀释后一抗的稳定保存时间。产品描述:按照每个抗体使用稀释液 10ml 计算,100ml的抗体稀释液可以稀释 10个(次)一抗或二抗。使用方法:参考一抗的使用说明,以及样品中目的蛋白的含量,按照适当比例稀释一抗。一抗稀释后即可直接用于 Western。一次 Western 结束后,可以回收稀释的一抗,4℃保存,以用于下次的Western。注意事项:1.为了能使抗体可以反复多次使用,建议尽量在 4℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括北京Western专用一抗二抗稀释液报价在内的一系列细胞生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:北京Western专用一抗二抗稀释液报价
编号:ZN1920
规格:100ml
品牌:百奥莱博
产地:北京
保存条件:4℃保存,6个月有效。
产品说明:Western blotting 专用一抗二抗稀释液适用于蛋白印迹时一抗和二抗的稀释。
本产品的主要有效成分为经过反复优化的适量 BSA、适当的去垢剂和一抗稳定试剂等,能有效减少一抗的非特异性结合,有效提升稀释后一抗的稳定保存时间。
产品描述:按照每个抗体使用稀释液 10ml 计算,100ml的抗体稀释液可以稀释 10个(次)一抗或二抗。
使用方法:参考一抗的使用说明,以及样品中目的蛋白的含量,按照适当比例稀释一抗。一抗稀释后即可直接用于 Western。一次 Western 结束后,可以回收稀释的一抗,4℃保存,以用于下次的Western。
注意事项:
1.为了能使抗体可以反复多次使用,建议尽量在 4℃进行一抗和蛋白膜的结合反应,以减缓一抗的衰减速度。
2.如果发现有沉淀或细菌污染请弃用。
北京Western专用一抗二抗稀释液报价极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·Collagen V mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN0311
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:hμman,rat,mouse
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.Collagen V mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
Collagen的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
北京Western专用一抗二抗稀释液报价关键词:百奥莱博,Western专用一抗二抗稀释液,ZN1920
GL0149 SOB培养基(pH7.0) 500ml
SNM093 蔗糖磷酸合成酶测定试剂盒(紫外比色法) Sucrose phosphoric acid synthetase assay kit
GL1177 碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液(10×) 500ml
GL1560 BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒 50ml
GL0424 Thomas磷钼酸苏木素染色液 2×100ml
SNM295 血沉测试液 ESR test solution
GL1422 Acr-Bis(29.1%:0.9%) 500ml
GL1825 游离血红蛋白检测试剂盒(邻-甲联*(代"*")*(代"胺")比色法) 50T|100T
GL0721 邻*二酚紫指示剂 100ml
SNM496 APES APES
SK223 土壤几丁质酶检测试剂盒 Soil chitinase assay kit
GL2049 天门冬*酸*基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏比色法) 100T
GL0997 PBS-Triton去污剂 100ml
SK105 线粒体异柠檬酸脱*酶检测试剂盒 ICDHm Test Kit
GL0237 硬组织线粒体分离试剂盒 50T
SNM153 总蛋白测定试剂盒(带标准:双缩脲法) Total protein quantitative assay kit
GL1244 P:C(25:24,pH﹤5.0) 100ml
GL0064 Earle"s平衡盐粉剂(无**糖) 1×EBSS 1L|10×1L
GL0505 乙酰胆碱酯酶染色液(铅铜硫胆碱法) 3×20ml|3×50ml
SNM354 血管通透性测试(伊文思蓝)染液 Vasopermeability (Evan"s Blue)Stain Kit
北京Western专用一抗二抗稀释液报价关键词:百奥莱博,Western专用一抗二抗稀释液,ZN1920
GL0790 焦油紫染色液 0.06%|0.1% 100ml
SNM555 DMEM高糖培养基(含L谷*酰胺,不含丙*(代"酮")酸*,不含酚红,含HEPES) DMEM high glucose medium
GL1749 乙酸*溶液(3mol/L,pH5.5) 500ml
SNM011 脂肪酶测定试剂盒(微板法) Lipase assay kit
GL1073 碳酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH9.2) 500ml
SK167 α-葡萄糖苷酶检测试剂盒 α-GC Test Kit
GL1984 甘油三酯(TG)检测试剂盒(GPO-PAP单试剂比色法) 100T
SNM212 胰岛素试剂盒(胶乳增强 免疫比浊法) Insulin assay kit
GL1311 Trizol(总RNA提取试剂) 100ml
GL0152 SB固体培养基粉剂(Super Broth) 1L
GL0604 酒精-福尔马林-甘油固定液 500ml
SNM414 细胞核/浆蛋白抽提试剂盒 Nuclear / plasma protein extraction kit
GL1565 *基黑10B染色液 100ml
GL0427 Gordon-Sweets银*溶液 100ml
GL0885 硝酸盐还原实验试剂 2×50ml
SK023 硫氧还蛋白氧化还原酶检测试剂盒 TrxR Test Kit
GL1829 高铁血红素白蛋白定性检测试剂盒(Schumm法) 50T
GL0724 丙基红指示剂 100ml
GL1151 DNA凝胶加样缓冲液(10×DNA Loading Buffer) 5ml
SK226 土壤有效硅检测试剂盒 Soil available silicon assay kit
GL2052 乳酸脱*酶(LDH)检测试剂盒(LD-L微板法) 100T
SNM272 前白蛋白测定试剂盒(免疫浊度法) Prealbumin Assay Kit
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文献和实验,还借用师兄师姐的二抗多次,一样是空白结果,所以排除一抗二抗的问题。3.配胶浓度问题:换了好几种分离胶浓度,仍无条带。4.孵育时间问题:一开始一抗过夜,二抗 2 小时孵育,最后改为一抗过夜,后再平遥一小时,二抗过夜,结果仍无条带。5.样本问题:将样本送到师兄和厂家那里能做出结果,师兄的样本借我后,仍做不出结果,排除样本问题。6.TBST 洗膜液浓度问题:借用师兄的洗膜液配置牛奶和洗膜,仍无条带。7.运气问题:为了驱赶不好的运气,菜鸟师姐和淑女师妹回家呆了半个多月,求神祈福,查找各种 Western
不容易转通。基本都是进口膜!质量应该不差。 P0021A Western转膜液 1L 30.00元 P0022 丽春红染色液 120ml 85.00元 四、抗体孵育 P0023B Western封闭液 100ml 96.00元 (PS:也可以用5%脱脂牛奶代替专用封闭液,光明牌,大约三十一包,超市有卖!如用牛奶配请自行调整浓度一般在3-10%之间) P0023A Western一抗稀释液 100ml 96.00元 一抗 请订购外国公司产品如sant cruse、sigma
Western封闭液(P0023B),在摇床上缓慢摇动,室温封闭60分钟 。对于一些背景较高的抗体,可以4℃封闭过夜。在整个Western过程中我们推荐使用碧云天的侧摆摇床(ESHK02)或类似仪器,侧向摆动速度比较缓慢,而且也容易让溶液覆盖蛋白膜。 5. 一抗孵育(Primary antibody incubation) Ø 参考一抗的说明书,按照适当比例用Western一抗稀释液(P0023A)稀释
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