BCIP/NBT显色试剂盒(蓝-紫)销售

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名称：BCIP/NBT显色试剂盒(蓝-紫)销*(代"售")
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：ZN1965
保存：频繁使用时置 4℃，不常使用时置-20℃。
有效期：一年。
碱性磷酸酶是免疫和分子生物学最重要的标记物之一。其不溶性显色底物主要有*芬磷酸盐和 5 * 4 * 3 吲哚磷酸盐(BCIP)。BCIP 配合硝基四氮唑蓝(NBT)显色呈鲜艳的蓝色，可用于免疫组化及各种斑点检查法。
试剂盒中内容：
显色剂 A：BCIP／NBT×20倍浓缩液，3ml。
显色剂 B：×20倍 TRIS 浓缩缓冲液，PH9.4，3ml。
使用方法：
1．在碱性磷酸酶的检测完成以后，TBS 充分洗涤，一般 5分钟×4次。不得使用磷酸盐缓冲液。
2．按 1ml 蒸馏水加１滴显色剂 A和 1 滴显色剂 B，混匀，加至标本上。一般避光显色 10-30分钟。若无背景出现则可继续显色。直至显色满意为止。
3．蒸馏水充分洗涤以终止反应。必要时核固红复染。
4．水溶性封片剂封片，观察。

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9005-64-5 Tween-20  吐温-20
B0401 标准新生牛血清(辐照灭菌) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
GeneGreen核酸染料 
ARB10415 人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)含量测试 Human soluble phospholipase a2,spl-a2 ELISA KIT
ARB12229 大鼠血栓前体蛋白(TpP)elisa检测说明书 Rat thrombus precursor protein,tpp ELISA KIT
乙酸*溶液(3mol/L,pH7.0,无菌)   500ml
4-乙*(代"烯")基*硼*(代"酸") (±)-Verapamil hydrochloride 2156-04-9
DN1201 细菌基因组DNA提取试剂盒(溶液型)
ARB12085 大鼠水通道蛋白1(AQP-1)含量分析 Rat aquaporin 1,aqp-1 ELISA KIT
SJ0854 驴血清
戊二醛固定液(2.5%)   100ml|500ml|5L
BL1309 2×Taq PCR MasterMix(含染料)
焦油紫 3,5-Difluoropyridine 10510-54-0
BL1299 pET-32a(+)
F030835 BIOTIN标记山羊抗鸡IgY IgG抗体 Polyclonal Goat Anti-Chicken IgY(IgG)*BIOTIN
葡萄糖基-β-环糊精 γ-MDH
Western blot二抗稀释液   50ml|100ml
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细胞核提取试剂盒   50T|100T
干酪素* Sodium citrate dihydrate 9005-46-3
PY08-010  卵黄甘露醇高盐琼脂平板 9CM  10皿/盒，用于金黄色葡萄球菌的选择性分离培养
ARB11828 人踝蛋白(tAlIn)含量检测 Human talin ELISA KIT
N-乙酰-L-谷*酰胺 Cytochalasin B 2490-97-3
31282-04-9 Hyaromycin B   潮霉素B
BTN80927 大提柱式细菌DNAOUT Maxi Column Bacterial DNAOUT
pUC18/MspI（34-501bp） 20次|50次
9050-94-6 葡聚糖凝胶G-100 Sephadex G-100medium
D-缬*酸甲酯盐*(代"酸")盐 Citric acid 21685-47-2
N-硝基-L-精*酸 cis-Aconitic acid 2149-70-4
ARB12184 大鼠白细胞介素2(IL-2)酶联免疫定量检测 Rat interleukin2,IL-2 ELISA KIT
DTT-PBS溶液(10mmol/L)   100ml
ARB13920 猪角化细胞生长因子(KGF)Elisa分析 Porcine keRatinocyte growth factor,kgf ELISA KIT
ARB12873 小鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)尿液中含量检测 Mouse soluble endothelial protein c receptor,sepcr ELISA KIT
甲基红-亚甲基蓝指示剂   100ml
D-泛酸* Reinecke salt 867-81-2
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·Nrli2 mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN1024
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Nrli2 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Nrli2的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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