大鼠MIP3 alpha/CCL20重组蛋白 分子生物学试剂

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名称：大鼠MIP3 alpha/CCL20重组蛋白 分子生物学试剂
编号：ZN1812
规格：100ng
品牌：百奥莱博
产地：北京
来源：大肠杆菌
特异性：大鼠
应用：WB 阳性对照
形态：冻干粉
纯度：>98%，RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件：-20℃保存 1 年以上，避免反复冻融。

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HR0373 改进型蛋白电泳考马斯亮蓝脱色液 Improved protein electrophoresis, Coomassie brilliant blue color liquid
WE0129 一步法RT-PCR试剂盒 UltraRT One Step RT-PCR Kit
SV0384 HaeII限制性内切酶 HaeII Restriction Endonuclease
SY0461 多聚L-赖*酸(分子量15万～30万) Poly-L-lysine, Mw 150,000-300,000
KFS222 Caspase-9蛋白检测试剂盒 Caspase-9 Detection Assay(Western Blot)
YT137 TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法) Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit
SV1278 Quick-Load Purple 2-Log DNA Ladder
BTN60806 一步式细菌DNA提取试剂盒 One-step Bacteria DNA extraction kit
WE0277 SDS-PAGE快速电泳液 Fast SDS-PAGE Running Buffer(10×)
YT549 L-*丙*酸脱*酶 L-Phenylalanine Dehydrogenase (Crude Enzyme)
ALH209 KOD DNA聚合酶 KOD DNA Polymerase
BTN90801A 一站式TA克隆试剂盒 One-Stop TA Cloning Kit(A)
RFT152 EB染色液 EB staining solution
SY0204 AFP1-GFP报告基因质粒 AFP1 GFP Reporter Plasmid
HR0574 破膜剂 Film breaking agent
BTN130676 Dicer(RNase III)
大鼠MIP3 alpha/CCL20重组蛋白 分子生物学试剂关键词：百奥莱博,ZN1812,大鼠MIP3 alpha/CCL20重组蛋白

KFS325 PE-BRDU细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法) BrdU cell proliferation Detection Kit
SV0127 BfuCI限制性内切酶 BfuCI Restriction Endonuclease
SV1451 羊抗兔 IgG 磁珠
BTN120654B Southern专用DNA Marker(DIG标记) Southern DNA Marker(Labeled by DIG)
YT042 细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒 Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit
YT897 细胞活力检测试剂盒(化学发光法) Luminescent Cell Viability Assay Kit
HR0097 植物膜蛋白提取试剂盒 Plant membrane protein extraction kit
BTN130544 AEBSF溶液(10mg/mL) AEBSF Solution
YT397 cDNA第一链合成试剂盒II(RNase H-) First Strand cDNA Synthesis Kit II (RNase H minus)
SY0308 曲拉通X-100(分子生物学级) Triton X-100, Molecular Biology Grade
KFS080 5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(25%甘油) 5×SDS-PAGE loading buffer(With 25% Glycerol)
BTN130822 苏木素染色液(Gill法) Hematoxylin Staining Solution
SY0105 ERSE-Luc荧光素酶报告基因质粒 ERSE luciferase reporter plasmid 
BTN71201 动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol) Animal RNA column extraction kit(Trizol)
WE0134 SuperSYBR Mixture(低含量ROX校正染料) SuperSYBR Mixture(Low ROX)
SV0401 HindIII限制性内切酶 HindIII Restriction Endonuclease
SV1609 SNAP-Biotin
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·LRH mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN0853
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：rat
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.LRH mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
LRH的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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