250bp DNA ladder(250～5000bp)怎么

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

250bp DNA ladder(250～5000bp)怎么卖由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多250bp DNA ladder(250～5000bp)等核酸电泳和回收产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：250bp DNA ladder(250～5000bp)怎么卖
编号：RFT006
规格：100T(2×250μl)
品牌：百奥莱博
产地：北京
本产品是由9条带状双链DNA组成的即用型DNA Ladder，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。含有1×loading buffer，可根据实验需要，直接取2-5μl电泳，使用方便，电泳图像清晰。9条带包括250，500，750，1000，1500，2000，2500，3000，5000bp，其中1500bp条带为100ng/5μl，其余条带浓度为50ng/5μl。



使用方法：
1. 取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中(每1mm×1mm加样孔加1μl，如果加样孔宽于5mm，可以适当增加上样量)就行电泳。
2. 建议电泳条件：凝胶浓度为1.0％，凝胶长度8～10cm，电泳电压4～10v/cm，电泳时间30-35分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。

注意事项：
1. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。

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·2×Tricine上样缓冲液(还原，2×)
编号：RFT154
英文名称：2×Tricine Loading Buffer (reducing，2×)
规格：10×1ml
2×Tricine上样缓冲液是以*酚蓝为染料，2倍浓缩的Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于还原型Tricine-SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。该缓冲液中含有DTT，可使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂，通过二硫键连接的各蛋白亚单位彼此分离，经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。

操作步骤：
1、将上样缓冲液(还原，2×)与蛋白样品按照1：1的比例混匀。
2、将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5分钟。
3、待蛋白样品充分变性后冷却至室温，12000rpm，4℃离心3-5分钟。
4、离心后，以微量进样器取适量上清，直接加入Tricine-SDS-PAGE凝胶加样孔内。
5、进行常规电泳，通常染料到达距离凝胶底端0.5 cm-1 cm处即可停止电泳。

注意事项：
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、本试剂含有DTT，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

储存条件：-20℃。


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·15kb plus DNA ladder(250～15000bp)
编号：RFT012
规格：100T(2×250μl)
本产品是由10条带状双链DNA条带组成的DNA Ladder，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。含有1×loading buffer，可根据实验需要，直接取2-5μl电泳，使用方便，电泳图像清晰。10条带大小包括250，500，1000，1500，2500，4000，5000，7500，10000，15000bp。其中2500bp条带为100ng/5μl，其余条带浓度50ng/5μl。



使用方法：
1. 取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中就行电泳。
注：根据梳子的厚度和宽度进行上样。
每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μl；
窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μl；
宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μl；
如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子，可以适当调整上样量。
2. 建议电泳条件：凝胶浓度为0.8-1.0％，凝胶长度10cm，电泳电压4-10v/cm，电泳时间35-40分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。

注意事项：
1. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。


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·RIPA裂解液(强)
编号：RFT156
英文名称：RIPA Lysis Buffer
规格：100ml
本品是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。RIPA裂解液(强)的主要成分为50mMTris (pH 7.4)，150mMNaCl，1% Triton X-100，1% sodiu*(代"m") deoxycholate，0.1% SDS，以及sodiu*(代"m") orthovanadate，sodiu*(代"m") fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用方法：
对于培养细胞样品：
1、融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2.1、 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
2.2、对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：
1、把组织剪切成细小的碎片。
2、融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3、按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4、用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

注意事项：
1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2、需自备PMSF。
3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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