考马斯亮蓝G250价格厂家

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名称：考马斯亮蓝G250价格厂家
编号：SY0300
品牌：百奥莱博
规格：10g
英文名：Coomassie Brilliant Blue G250
考马斯亮蓝是两种相似三*甲*(代"烷")染料的总称，有G250和R250两种，结构上前者比后者多了2个甲基，命名上 “G”为Green 的缩写，因G250的蓝色染料泛浅绿色；命名上“R”为Red的缩写，因R250的蓝色染料呈微红色调；“250”表示考马斯亮蓝的纯度。生化实验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。工作原理是：通过与蛋白质内的*基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力，考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子（如磺酸基），从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。

考马斯亮蓝R250更多用于电泳蛋白的染色，染色灵敏度比*基黑高5倍，可达0.1µg蛋白。但是染色背景比较深，需要褪色后才能进行蛋白条带的观察。考马斯亮蓝G250对蛋白胶染色的灵敏度相对较差，最低检测到0.5µg蛋白。但是因其在三*乙酸中不溶而以胶体形式存在，选择性的和蛋白质结合形成复合物，染色迅速，着色深的蛋白质条带数秒内可以显现出来，约45min后着色最深。而且染色背景低，不需要脱色即可进行蛋白条带的观察。因此，非常适合对电泳凝胶蛋白的快速定性分析。

考马斯亮蓝G250较多的用于溶液体系中蛋白的定量分析，即 Bradford蛋白结合检测法（Bradford protein-binding assay），此方法利用的就是G250与蛋白质结合的特性，Bradford试剂（也就是酸化的G250溶液）为阳离子，主要为双质子化，溶液为红色，其最大吸收波长（Amax）为470 nm。当与蛋白稳定结合后，G250以阳离子，非质子化的形式存在，溶液变为蓝色，最大吸收波长迁移到595 nm。蓝色阳离子形式染料的量与样本中蛋白的量成正比，因此通过直接测定595nm的吸光度来反映蛋白量。此法的优点在于G250与蛋白质结合所需的时间较短（约2min左右），且结合的G250-蛋白质复合物室温下约1h内保持稳定。反应灵敏度高，是一种非常常用的微量蛋白快速定量方法。

产品性质：
中文别名：酸性蓝90；考马斯亮蓝G；康美赛蓝G250 
英文别名：Acid blue 90 Coomassie Brilliant Blue G
CAS：6104-58-1
分子式：C47H48N3NaO7S2
分子量：854.02
外观：蓝色至红色结晶粉末
溶解性：微溶于水，最好先溶于甲醇或者乙醇。
储存条件：室温
结构式：


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·1×RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)
编号：SY0321
英文名称：1×RIPA Lysis Buffer (Strong),without enzyme inhibitors
规格：100ml
本品为裂解强度相对较强的RIPA裂解液（1×），裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。

注意事项

1）本品不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂，使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。
2）裂解样品的所有步骤均需在冰上或4℃进行。
3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（SY0298）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

(一) 培养细胞样品：
1）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF等抑制剂，使PMSF的最终浓度为1mM。
【注】：请根据实验情况选用酶抑制剂。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

（二）组织样品：
1）把组织剪切成细小的碎片。
2）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF等抑制剂，使PMSF的最终浓度为1mM。
【注】：请根据实验情况选用酶抑制剂。
3）按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
【注】：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。


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·ISRE-GFP报告基因质粒
编号：SY0170
英文名称：ISRE GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
ISRE GFP Reporter Plasmid是用于检测STAT1/STAT2转录活性水平为目的的报告基因。STATs是一类重要的核转录因子，共包括STAT1~STAT4，STAT5a，STAT5b及STAT67个成员，它们与细胞增殖、分化和凋亡密切相关，其中STAT1和STAT2参与了细胞的凋亡控制。

ISRE-GFP报告基因主要检测细胞Type I Interferon信号通路中STAT1/STAT2的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMISRE-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个STAT1/STAT2结合位点，可以高效地检测STAT1/STAT2的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得ISRE-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM ISRE -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMISRE-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

·高保真DNA聚合酶
编号：SY0036
英文名称：Pfu DNA Polymerase
规格：100U
Pfu DNA Polymerase是经过基因工程改造的，新一代超保真DNA聚合酶，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性，可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升，即使是非常复杂的模板，也能准确快速的完成反应。

本产品中附带的5×Phanta SF反应缓冲液对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1×终浓度为2 mM)，可以使用产品中提供的DMSO或MgSO4对反应体系进行优化。另外，产品中附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。

产品特点：
• 保真度是Taq DNA Polymerase的52倍
• 扩增速度是常规聚合酶的4-150倍
• 广泛的模板适应性
• 优化的缓冲体系广泛适用于各种类型模板，便于快速得到理想的扩增结果
• 提供PCR Enhancer以帮助扩增高GC含量的模板
• 提供即用型的预混液，最大程度地减少实验步骤

产品组份：
5×SF Buffer(with 10mM MgSO4)：1.25 ml
25 mM MgSO4：1 ml
dNTP Mix(10 mM each)：100 μl
Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)：100 μl
5×PCR Enhancer：500 μl
DMSO：100 μl
10×Loading buffer：1.25 ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
储存条件：-20℃。

质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：50 μl PCR体系中加入1U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：50 μl PCR体系中加入1U本品，以10 ng人基因组DNA为模板扩增30个循环，取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。

引物设计注意事项
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。


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·一步法(快速/无缝)克隆试剂盒
编号：SY0279
英文名称：One Step Pcr Cloning Kit
规格：25T
一步法（快速/无缝）克隆试剂盒是一款简单、快速、高效的DNA定向克隆产品，该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点，可高效克隆50 bp～10 kp片段。将载体在克隆位点进行线性化，并在插入片段PCR引物5’端引入线性化克隆载体末端序列，使得插入片段PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列 (15 bp～20 bp)。将这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合，在重组酶Exnase的催化下，仅需反应30 min即可进行转化，完成定向克隆。克隆阳性率可达95%以上。克隆载体酶切产物或PCR产物和插入片段PCR产物可以不进行DNA纯化直接用于重组克隆，极大的简化了实验步骤。

试剂盒中包含有重组反应所需缓冲液和重组酶Exnase，Exnase中添加了独特的重组增强因子，显著提高重组克隆效率，即便使用低效率感受态细胞 (107 cfu/μg)也可实现高效克隆 (100 cfu/ng Vector)，而且Exnase还兼容常规酶切、PCR反应体系。

一步法（快速/无缝）克隆试剂盒可用于快速克隆、高通量克隆、无缝克隆和DNA定点突变。

产品组份：
5×CE Buffer——————100μl
Exnase——————50μl
500 bp control insert (25 ng/μl)——————5μl
pUC 19 control vector, linearized (50 ng/μl)————5μl

实验流程概览

1) 线性化克隆载体制备；
2) 插入片段扩增引物设计；
3) 插入片段PCR扩增；
4) 进行重组反应；
5) 反应产物转化、涂板；
6) 克隆鉴定。


图一 实验流程概览

注：插入片段PCR扩增时，引物5’端引入线性化克隆载体末端同源序列 (图中以蓝色和橙色标记)，使得扩增产物5’和3’最末端序列分别和线性化克隆载体两末端序列完全一致。

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