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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
344
- 英文名:
Biotin-labeled HIF-1α Probe For EMSA
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
HIF-1 α consensus oligo的序列如下:
5"-TCT GTA CGT GAC CAC ACT CAC CTC-3"
3"-AGA CAT GCA CTG GTG TGA GTG GAG-5"
本生物素标记EMSA探针已经过纯化,可以直接用于EMSA结合反应。本生物素标记EMSA探针可以和百奥莱博的化学发光法EMSA试剂盒(YT190)配套使用。
注意事项:
1. 避免加热到40℃以上,温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于基于生物素标记的EMSA检测的详细操作可以参考百奥莱博的化学发光法EMSA试剂盒(YT190)的使用说明。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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文献和实验Shift Assay ) 凝胶迁移实验是一种研究DNA与蛋白质或RNA与蛋白质相互作用的常用技术。这项技术是基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合体在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中有不同迁移率的原理。当核转录因子与一条人工合成的特异的DNA或RNA结合后,其在PAGE中的迁移率将小于未结合核蛋白转录因子的DNA,从而检测到活化的与DNA或RNA结合的蛋白转录或调节因子。 发展: 从发展史来看,这项实验技术起初是用32P同位素标记人工合成的寡核苷酸形成探针,但是由于同位素的放射
(通常是含有转录因子结合位点的启动子序列)相互作用的调控蛋白/转录因子,获得目的基因的启动子序列后,使用该方法可以筛查48/96种常见的调控蛋白/转录因子与启动子序列结合情况。该方法利用转录因子与特定DNA序列结合的特点,针对每一种转录因子设计相应的生物素标记探针;当混合探针与核蛋白样本共同孵育时,探针与相应的转录因子结合形成转录因子/探针复合物;除去游离的探针,收集转录因子/探针复合物;分离复合物中的DNA探针,探针的量与转录因子含量呈正相关。在探针混合物中同时加入启动子片段,如果DNA序列中含有
实验需要制胶、跑胶、转膜、检测等步骤,操作稍显繁琐;特别是在样本量较大的时候,更显得力不从心。 为了解决这些转录因子检测中的问题,美国Signosis开发出了一种快速高效的半定量活性转录因子检测方法——滤板法。这种方法同样基于转录因子与特定DNA序列结合的原理,以标准96孔板为载体进行实验操作。针对不同的转录因子设计特异性的生物素标记DNA探针,探针与样本核提取物中相应的转录因子结合形成TF/DNA复合物。用滤板除去游离的DNA探针,随后从滤板上洗脱并收集TF/DNA复合物中的DNA探针。用标准
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