化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销售化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒厂家
编号：YT032
规格：1000cm2
产地：国产|进口
英文名：Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detection Kit
品牌：百奥莱博

化学发光法生物素检测试剂盒是一种通过Streptavidin-HRP及后续的BeyoECL Star试剂来实现化学发光检测Biotin标记核酸的检测试剂盒。适用于Southern blot、Northern blot、ribonuclease protection assay (RPA)或EMSA等实验中，采用生物素标记的DNA或RNA探针时的检测。本试剂盒不适用于生物素标记蛋白的检测。
本试剂盒同时还提供了封闭液、洗涤液等检测时所需的配套试剂。
本试剂盒采用了高质量的Streptavidin-HRP Conjugate，HRP和Streptavidin共价交联的比例大于3，这样比采用Streptavidin和Biotin-HRP conjugate两种试剂进行检测要更方便，并且灵敏度更高。
采用了非特异性结合比avidin更低的strepatavidin，使检测结果背景更低灵敏度更高。
本试剂盒没有提供生物素探针标记相关的试剂，生物素标记的DNA探针或EMSA探针的制备可以相应地使用我公司生产的生物素3"末端DNA标记试剂盒(D3106)或EMSA探针生物素标记试剂盒(GS008)。
本试剂盒可以用于检测至少10块10 x 10cm有生物素标记EMSA探针的膜，即共1000cm2。
保存条件：
D3308-3 Streptavidin-HRP Conjugate在-20℃保存，其余可4℃保存。如果长期不用，整个试剂盒可-20℃保存，-20℃可以保存更长时间。
注意事项：
需自备带正电荷尼龙膜，以及凝胶电泳时所需的相关试剂。带正电荷尼龙膜(FFN12/FFN16)可以向我公司订购。
如果需要使用更多的封闭液或洗涤液，可另外单独订购D3308B封闭液或D3308W洗涤液(5X)。

使用说明：
1. 在使用Biotin标记探针的情况下，完成Southern、Northern杂交及后续洗涤后，或RPA的转膜和交联后，或EMSA的转膜和交联后，可以使用本试剂盒开始检测。下面的检测过程中溶液的用量是用于一片10x10cm膜的量。如果膜较大或较小，各溶液的用量可以按比例放大或缩小。
2. 37-50℃水浴溶解封闭液和洗涤液。注意：封闭液和洗涤液必须完全溶解后方可使用，封闭液和洗涤液可以在室温至50℃之间使用，但必须确保这两种溶液中均无沉淀产生，在冬天需特别注意。
3. 取一合适的容器加入15ml封闭液，再放入交联过的含有样品的尼龙膜。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。
4. 取7.5μl Streptavidin-HRP Conjugate加入到15ml封闭液中(1:2000稀释)，混匀备用。
5. 去除封闭液，加入上一步中配制的15ml含有Streptavidin-HRP Conjugate的封闭液。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。
6. 取25ml 洗涤液(5X)，加入100ml重蒸水或MilliQ级纯水，混匀配制成125ml洗涤液。
7. 将尼龙膜转移至另一装有15-20ml洗涤液的容器内，漂洗1分钟。
8. 去除洗涤液，加入15-20ml洗涤液，在侧摆摇床或水平摇床缓慢上洗涤5分钟。
9. 重复步骤8三次(共洗涤四次)，每次洗涤时间均约为5分钟。
10. 将尼龙膜转移至另一装有20-25ml检测平衡液的容器内，在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动5分钟。
11. 取5ml BeyoECL Star A液和5ml BeyoECL Star B液混匀，配制成BeyoECL Star 工作液。注意：BeyoECL Star工作液必须现配现用。说明：从本步骤起操作方法和注意事项同Western实验的荧光检测。
12. 取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。立即将膜的样品面向上，放置到处于水平桌面上的洁净容器内或保鲜膜上。
13. 在尼龙膜的表面小心加上步骤11配制好的共10ml BeyoECL Star工作液，使工作液完全覆盖尼龙膜。室温放置2-3分钟。
14. 取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。将尼龙膜放在两片保鲜膜或其它适当的透光薄膜中间，并固定于压片暗盒(也称片夹)内。
15. 用X光片压片1-5分钟。可以先压片1分钟，立即显影定影，然后根据结果再调整压片时间；也可以直接分别压片30秒、1、3、5分钟或更长时间，然后一起显影定影观察结果。

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·质粒中量抽提试剂盒
编号：YT002
英文名称：Plasmid Midi Preparation Kit
规格：50次

质粒中量抽提试剂盒是一种用于从大肠杆菌中进行中量质粒的快速抽提的试剂盒。
本试剂盒采用了一种新型的离子交换柱。在特定条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间，结合到质粒纯化柱上，在一定条件下又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的快速纯化。无需酚氯*(代"仿")抽提，无需酒精沉淀，12个样品只需不足60分钟即可完成。
两步过柱纯化，使质粒纯度进一步提高，达到转细胞级要求。
无需高速冷冻离心机，只需普通台式高速离心机。所有操作均可在1.5ml离心管中完成。
每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限约为50微克。每个纯化柱可用于抽提5-10毫升用LB培养过夜的大肠杆菌。抽提所得质粒的OD值一般在1.80左右。抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD值也会因菌种不同等原因而略有波动。
由本试剂盒所得质粒可直接用于转染细胞，DNA测序，PCR，基于PCR的突变，体外转录，转化细菌，内切酶消化等。本试剂盒抽提的含Fireflyluciferase或Renilaluciferase报告基因的质粒，用Lipofectmine2000或Fugene6转细胞，报告基因检测结果表明仅0.5微克受SV40启动子控制的质粒转化12孔板内的一孔原代贴壁细胞，总RLU值约为五百万，测定时间为10秒。
内毒素(endotoxin)含量低。用对内毒素敏感的细胞转染受内毒素响应的报告基因质粒，与Qiagen昂贵的EndotoxinFree大抽试剂盒相比，检测结果完全一致。
保存条件：
室温保存，一年有效。
注意事项：
第一次使用前把试剂盒提供的RNaseA全部加到溶液I(悬浮液)中，混匀，并在瓶上做好标记。加入RNaseA后4℃存放。
第一次使用前在每瓶溶液IV(洗涤液)中加入54ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
温度较低时，溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，37℃水浴加热溶解，混匀后使用。溶液II请勿过分剧烈混匀，否则会产生大量气泡。
溶液II使用完后，一定要盖紧瓶盖，防止被空气中二氧化碳酸化。
溶液II有强碱性，溶液II和溶液III对人体都有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护。
本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。

使用说明：
1.取过夜菌至3个1.5毫升离心管中，5000g离心1分钟收集细菌沉淀，弃上清。再重复一次，每管共收集3毫升过夜菌沉淀。通常大抽杆菌宜用LB培养过夜(16小时左右)至OD值为2-4。建议5000g(通常为5000rpm左右)室温离心1分钟，如沉淀不充分则适当延长离心时间。时间过长或离心速度过快会使沉淀过于紧密，不利于加入溶液I后散开沉淀。直接倒掉上清，再倒入约1.5毫升菌液并重复上述操作，然后倒置于吸水纸上(可用普通草纸)，使液体流尽。如果细菌密度明显偏低，可考虑使用更多菌液，再重复上述操作1-2次。对于高拷贝质粒所用菌量每管一般不能超过5毫升，对于低拷贝质粒所用菌量每管一般不能超过10毫升。过量的菌会导致后续的裂解不充分。
2.每管加入250微升溶液I，重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开，无可见细菌团块。确认溶液I中已经添加了RNaseA。最高速度vortex5-10秒或更长时间，悬起沉淀。一定要充分混匀，对着光亮处观察应呈均匀的悬浊液，无明显细菌团块或絮块。如果没有vortex，可以用枪吹打沉淀使沉淀逐渐散开或用手指把沉淀弹开。
3.每管加入250微升溶液II，轻轻颠倒离心管4-6次，使细菌完全裂解，溶液透明。切勿vortex！vortex或其它剧烈操作会导致基因组DNA断裂，易导致最终所得质粒被基因组DNA污染。颠倒4-6次后，溶液应变得透明，无团块或絮状物。如果加入溶液I后细菌没有完全散开，那么颠倒4-6次后，可能还会有团块或絮状物。遇到有少量团块或絮状物产生的情况，可以增加颠倒次数3-5次，再室温放置2-3分钟，但总裂解时间不可超过5分钟。
4.每管加入350微升溶液III，随即颠倒离心管4-6次混匀，可见白色絮状物产生。切勿vortex！颠倒次数也不宜过多，否则易导致最终所得质粒的质量下降。
5.最高速(13,000rpm左右)室温离心10分钟。离心后会产生白色沉淀。离心时准备好下一步需使用的质粒纯化柱，废液收集管，并在纯化柱上做好标记。
6.将上一步骤离心后的上清倒入或吸入到质粒纯化柱内。最高速离心30-60秒，倒弃收集管内液体。再重复两次，使三管质粒结合于同一纯化柱上。质粒倒入质粒纯化柱后，可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。
7.在质粒纯化柱内加入750微升溶液IV，最高速离心30-60秒，洗去杂质，倒弃收集管内液体。加入溶液IV后可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。
8.最高速再离心1分钟，除去残留液体并使痕量乙醇完全挥发。注意：倒弃收集管内液体后再离心，才能彻底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV会影响质粒的质量。
9.将质粒纯化柱置于1.5毫升离心管上，加入120微升溶液V至管内柱面上，放置1分钟。溶液V需要直接加至管内柱面中央，使液体被纯化柱吸收。如果不慎将溶液V沾在管壁上，一定要震动管子，使液体滑落到管底，以被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或MiliQ级纯水替代溶液V，但是水的pH应不小于6.5。溶液V加入后放置时间稍长，对于增加质粒产量会略有帮助。
10.最高速离心1分钟，所得液体中加入600微升溶液VI，混匀后加到原质粒纯化柱内。加入溶液VI后必须混匀！可vortex或颠倒混匀，混匀后切勿离心。
11.最高速离心30-60秒，倒弃收集管内液体。
12.在质粒纯化柱内加入750微升溶液IV，最高速离心30-60秒，洗去杂质，倒弃收集管内液体。加入溶液IV后可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。
13.最高速再离心1分钟，除去残留液体并使痕量乙醇完全挥发。注意：倒弃收集管内液体后再离心，才能彻底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV会影响质粒的质量。
14.将质粒纯化柱置于1.5毫升离心管上，加入120微升溶液V至管内柱面上，放置1分钟。用1.5毫升离心管作为收集管。溶液V需要直接加至管内柱面中央，使液体被纯化柱吸收。如果不慎将溶液V沾在管壁上，一定要震动管子，使液体滑落到管底，以便被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或MiliQ级纯水替代溶液V，但是水的pH应不小于6.5。溶液V加入后放置时间稍长，对于增加质粒产量会略有帮助。如想得到较高浓度的质粒，可以加入80微升溶液V洗脱。
15.最高速离心1分钟，所得液体即为转细胞级超纯质粒。通常所得质粒浓度为0.1-0.3mg/ml左右。如果想得到高浓度的质粒，可以采用常规的乙醇沉淀方法浓缩质粒。


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·微丝绿色荧光探针
编号：YT172
英文名称：Actin-Tracker Green
规格：0.2ml

Actin-Tracker Green是一种Actin绿色荧光探针，可以用于培养细胞或组织切片的Actin特异性荧光染色。
Actin-Tracker Green探针为荧光染料FITC标记的毒蕈肽(phalloidin)，即phalloidin-FITC，其分子量约为1251.4，最大激发波长为496nm，最大发射波长为516nm。
本产品可以用于细胞或组织内的微丝(microfilament)的荧光检测。
本产品使用时的推荐稀释比例为1:40-1:200。如果每个片子需要使用200μl染色工作液，每个包装的本产品足够用于40-200个片子的染色。
保存条件：
-20℃避光保存，一年有效。
注意事项：
为避免反复冻融，建议适当分装。
对于微量的液体，每次使用前先离心数秒钟，使液体充分沉降到管底。
荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
Phalloidin 有一定毒性(LD50为2mg/kg体重)，1ml Actin-Tracker Green中的phalloidin少于0.2mg，使用时请注意适当防护。


·Caspase-3抗体
编号：YT152
英文名称：Caspase-3 antibody
规格：>20次

本Caspase-3抗体为进口分装，用人工合成的人Caspase-3本身的切割位点处一段多肽，经适当修饰后免疫rabbit，然后用protein A和抗原多肽亲和柱经过两步纯化得到的高纯度多克隆抗体。
本Caspase-3抗体可以识别全长的Caspase-3(35kD)，也可以识别Caspase-3被剪切后产生的17kD片断。未发现和其它Caspase家族蛋白有交叉反应。
Caspase-3是细胞凋亡过程中最关键的执行分子(key executioner)之一，可以剪切细胞凋亡过程中的许多关键蛋白，例如PARP。Caspase-3的激活需要从没有活性的全长Caspase-3(35kD)，在Asp28和Ser29之间及Asp175和Ser176之间进行剪切，产生有活性的17kD肽段。
Caspase-3的激活常被作为细胞凋亡的一个重要指标。
配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测时的一抗稀释。
建议本抗体使用时的起始稀释比例参考下表(实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整)。Western检测全长Caspase-3参考下表按照1:1000稀释，检测Caspase-3被剪切后产生的17kD肽段须根据Caspase-3的激活情况酌情稀释。
本抗体如果用于常规的Western检测至少可以检测20次。
保存条件：
Caspase-3抗体-20℃保存，Western一抗稀释液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀释液优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。
注意事项：
对于本抗体，Western检测时一抗要4℃缓慢摇动过夜，如果仅短时间与一抗孵育检测效果较差。
在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。



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