北京磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒品牌

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北京磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒品牌由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒等DNA纯化产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒品牌
编号：WE0206
规格：96次
英文名：MagBeads Gel DNA Extraction Kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
  本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的用于琼脂糖凝胶DNA回收的方法。它可以从用TAE或TBE制成的琼脂糖凝胶中回收100 bp以上的DNA片段，回收效率高达80%。溶胶液将琼脂糖胶溶解后，磁珠选择性的吸附DNA片段。经漂洗后，洗脱得到的DNA纯度良好，可用于测序、酶切、PCR、克隆等下游实验。

试剂盒组成：

 

组份	96次
Buffer MG	90ml
Buffer GW1	52ml
Buffer GW2	50ml
Buffer EB	30ml
Magbeads PN	2×1ml

自备仪器及试剂：
1、手动单管提取：恒温混匀仪；2/15ml磁力架；异丙醇、无水乙醇
2、手动96孔深孔板提取：恒温混匀仪；废液抽吸系统；手动连续分液器；电动连续分液器；手动连续分液器分液管(25ml)；96孔板磁力架；异丙醇；无水乙醇

实验前准备及重要注意事项：
1、电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2、切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
3、Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻和离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
4、Magbeads使用前需涡旋震荡20秒使其充分混匀。
5、如Buffer MG中出现沉淀，请在50℃水浴锅中重新溶解，摇匀后即可使用。
6、首次使用前应按试剂瓶标签在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
7、实验过程中，磁珠在溶液中的充分混匀对于提取的得率与纯度都有很大的影响。实验过程中务必使磁珠与溶液充分混匀。不同厂家生产的恒温混匀仪震荡混匀效果有一定差异，实验过程中请注意观察磁珠状态。如出现磁珠贴壁等未充分混匀的现象，请用移液器吹吸混匀或调整震荡频率。

操作步骤：

一、手动单管操作：
1、在长波紫外灯照射下将目的条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量去除多余的琼脂糖凝胶)，称重后将其放入干净的1.5ml离心管中。
2、向离心管中加入3倍胶体积的Buffer MG(如果胶块重0.1 g，其体积为100μl)后，将其放入50℃的水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡5秒钟。
3、将离心管从水浴锅中取出，检测胶块是否完全融化以及溶液是否由黄色变成紫色(如胶块未完全溶解，将离心管放回水浴锅中继续孵育；如溶液颜色由黄色变成紫色，向离心管中加入10μl 3M的醋酸*溶液)。短暂离心后，将离心管室温放置5分钟。
4、向离心管中加入20μl充分混匀的Magbeads，涡旋震荡5秒钟后将其放入25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟或连续颠倒混匀10分钟。
5、将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
6、将离心管从磁力架上取下，加入750μl Buffer GW1后涡旋点震1分钟或涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
7、将离心管从磁力架上取下，加入750 ul Buffer GW2(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
8、重复步骤7。
9、保持离心管固定于磁力架上，用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液，之后室温放置5-10分钟，使乙醇挥发干净。
注意：如果离心管侧壁上有液珠，可向离心管中加入750μl无水乙醇。盖盖后颠倒离心管(保持离心管固定于磁力架上)，之后彻底弃去无水乙醇。
10、将离心管从磁力架上取下，加入30-100μl Buffer EB。涡旋震荡使磁珠完全悬浮于洗脱液中后将其放于50℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟，或将离心管放于50℃水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
11、将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

二、手动96孔板操作：
1、在长波紫外灯照射下将目的条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量去除多余的琼脂糖凝胶)，称重后将胶块放入2ml 96孔深孔板(简称“深孔板”)中并记录每孔中的样品名称。
2、向深孔板中加入3倍胶块体积的Buffer MG(如果胶块重0.1 g，其体积为100μl)，盖盖后将96孔板放入50℃的水浴锅中孵育10分钟，期间将深孔板放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2次，每次10秒钟。
3、将深孔板从水浴锅中取出放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟，用8通道移液器向深孔板中加入20μl充分混匀的Magbeads。之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
4、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
注意：用废液抽吸系统去除溶液时需将真空泵调节至较小的负压力值，使溶液以一个合适的速度被吸走,速度过快会造成磁珠的丢失。
5．用手动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前检查是否已加入无水乙醇)，之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
6、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
7、用手动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前检查是否已加入无水乙醇)，之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
8、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
9、重复步骤7-8。
10、用手动连续分液器或8通道移液器向96孔深孔板中加入500μl无水乙醇，之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀1分钟。
11、将板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
12、保持深孔板固定于96孔板磁力架上，将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置2分钟。之后将深孔板从96孔板磁力架上取下放于100℃、1600 rpm的恒温混匀仪上静置5分钟。
13、用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板加入50-100μl Buffer EB，之后将深孔板放于100℃(因该恒温混匀仪为悬空加热，洗脱液实际温度在50-60℃之间)、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀10分钟。
14、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟，用8通道移液器溶液转移至96孔PCR板中盖盖后-20℃保存备用。

储存条件：室温(15～30℃)

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·2×BaHF MasterMix(含染料)
编号：WE0114
英文名称：2×BaHF MasterMix(With Dye)
规格：5ml
  本品为由BaHF DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×，具有操作简便快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好的优点，可最大限度地减少人为误差和污染。该产品所含的BaHF DNA Polymerase是经过特殊处理的热启动高保真聚合酶。该聚合酶具有5"-3"DNA聚合酶活性，5"-3"核酸外切酶活性和3"-5"核酸外切酶活性，在普通PCR条件下，与BaldStar Taq DNA Polymerase相比，具有扩增效率高、错配率低的优良性能。化学修饰使该酶在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活需要在95℃下孵育10分钟，该条件可以整合入已有的PCR热循环程序。优化的缓冲体系使酶的作用发挥最大功效，实现对目的片段的高保真、高特异性、高扩增效率、高灵敏度扩增。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。适用于常规的PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×BaHF MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×BaHF MasterMix含有BaHF DNA Polymerase,3.4 mM MgCl2和 400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因；
4、2～8℃存放三个月，活性无明显改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaHF MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	＜0.5μg	＜0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	94℃	30 s	30-40 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的BaHF DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4)本产品须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


北京磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒品牌关键词：磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,MagBeads Gel DNA Extraction Kit,WE0206

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北京磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒品牌关键词：磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,MagBeads Gel DNA Extraction Kit,WE0206

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