HRP标记兔抗山羊IgG(H+L)厂家

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")HRP标记兔抗山羊IgG(H+L)厂家，我公司供应的抗体抗原品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：HRP标记兔抗山羊IgG(H+L)厂家
编号：WE0387
规格：100μl
英文名：Rabbit Anti-Goat IgG, HRP Conjugated
品牌：百奥莱博
产地：北京
本产品为辣根过氧化物酶标记的经亲和纯化的兔抗体，特异识别山羊IgG，检测灵敏度高，本底低，可用于Western Blot、ELISA和免疫组化检测。HRP(Horseradish Peroxidase)即辣根过氧化物酶，可以催化DAB、TMB等底物显色或催化ECL等化学发光试剂产生化学反应而发光。

免疫原：山羊IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：无
防腐剂：无(叠氮*是HRP抑制剂，抗体稀释液中请避免使用叠氮*作为防腐剂)
应用范围：
WB(1：2000-10000)
ELISA(1：2000-20000)
IHC(1：100-200)

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·植物蛋白提取试剂盒
编号：WE0264
英文名称：Plant Protein Extraction Kit
规格：25次|100次
  本试剂盒可从新鲜、冰冻或干燥植物组织中提取可溶性植物蛋白。适用于多种植物及植物的不同部位(如根、茎、叶、花、种子等)蛋白提取，高效提取植物蛋白，比传统的方法提取蛋白产量大、活性高、速度快。所提蛋白可直接进行蛋白电泳分析、免疫沉淀、Western Blot、蛋白活性测定及蛋白纯化等实验。所提蛋白可用BCA蛋白定量试剂盒(货号：WE0276)进行浓度的测定。

试剂盒组成：

 

组份	25次	100次
Plant Protein Extraction Reagent	25ml	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	250μl	1ml

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本品含有1mM EDTA。
2、为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。
3、使用本产品提取蛋白后，可采用BCA法进行蛋白定量。
4、为了获得实验最佳效果，请根据实验调整最佳使用量。

使用方法：
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Plant Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、称量试验植物组织的重量。按照1 g组织加入5ml Plant Protein Extraction Reagent(在蛋白抽提前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)。
注意：
1)匀浆前将大块的植物组织剪成小块，机械匀浆器匀浆10 s，间歇10 s，反复三次进行裂解，根据组织样本不同选用适合的匀浆方式。
2)裂解液的使用量依据植物不同部位进行调整，若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少Plant Protein Extraction Reagent使用量。
3、匀浆后冰上孵育20-30分钟。
4、4℃ ～13400×g，离心20分钟。
5、收集上清中的可溶性蛋白，进行下一步的纯化或下游分析。

储存条件：-20℃


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·二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)
编号：WE0228
英文名称：NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
规格：24次|96次
  本试剂盒提供了构建DNA文库需要的酶预混体系及反应缓冲液，包含除接头以外的所有成分，制备的文库可用于Ion torrent PGM、Ion Proton二代测序平台的测序。和常规建库方法相比，该试剂盒将多个步骤进行了合并，省略了多个纯化步骤，因此显著降低了起始模板DNA的最少需求量，缩短了文库构建时间。另外，试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集，无偏好的PCR扩增，扩大了序列的覆盖区域，可高效的制备用于Ion torrent二代测序平台的DNA文库。

试剂盒组成：

组份	24次	96次
10×End Repair Buffer	200μl	800μl
End Repair Enzyme Mix	48μl	192μl
Ligation and Nick Repair Buffer	400μl	2×800μl
T4 DNA Ligase	48μl	192μl
Bst DNA Polymerase	48μl	192μl
2×HiFidelity PCR Mix	600μl	2×1.2ml
10×Primer Mix(5μM each)	150μl	600μl

自备仪器、试剂和耗材：
1、磁力架：建议使用Life公司磁力架。
2、DNA纯化回收试剂盒：建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)。
3、样本接头引物试剂盒。
4、无水乙醇，EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0)，去离子水(pH 在7.0-8.0之间)。
5、反应管：建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管；枪头：建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、避免试剂盒中Buffer的反复冻融，建议首次使用时将Buffer进行分装保存。酶在使用完应尽快放回-20℃保存，
2、PCR产物因操作不当极易产生污染，导致实验结果不准确，建议将PCR反应体系配制区与PCR产物纯化区隔离，并使用专门的移液器，定期对各实验区域进行清洁。

DNA建库流程示意图：

起始材料：5ng-1μg打断的双链DNA，溶于EB(10 mM Tris-HCl pH 8.0)或去离子水中，DNA纯度要求：OD260/OD 280=1.8-2.0。

DNA末端修复反应：
1、向200μl PCR管中加入以下成分，用枪头将上述溶液轻轻混匀，瞬时离心使所有组分收集到管底。

试剂	体积
10×End Repair Buffer	6μl
End Repair Enzyme Mix	2μl
fragmented DNA	X(10ng～1μg)
RNase-Free Water	Up to 60μl

2、将管子置入PCR仪中，热盖打开，反应程序如下：
20 min @ 25℃
10 min @ 70℃
Hold on 4℃

Adaptor 连接：
建议使用百奥莱博adaptor进行连接，也可选择使用Life、Kapa公司的adaptor，具体连接方法可参考各公司的产品使用说明书。以下为使用百奥莱博adaptor进行连接的操作步骤：
1、向上述反应液中直接加入以下试剂, 用枪头将上述试剂混匀，短暂离心，使溶液收集到管底。

试剂	体积
Ligation and Nick Repair Buffer	10μl
T4 DNA Ligase	2μl
Bst DNA Polymerase	2μl
Adaptor A	7μl
Adaptor P1	7μl
RNase-Free Water	12μl
Total volume	40μl

注意：建议Adaptor的加入量与DNA片段的摩尔比为10:1-20:1，具体Adaptor的使用浓度请参照下表。如果DNA量为10-100ng, adaptor建议使用浓度为1μM(小于260 bp)或 0.5μM(300-400 bp)。

插入DNA 量/反应	不同大小DNA 建议Adaptor 使用浓度
	130 bp	260 bp	320 bp	410 bp
1μg	10μM	10μM	5μM	5μM
500ng	5μM	5μM	2.5μM	2.5μM
100ng	1μM	1μM	0.5μM	0.5μM

2、反应步骤：
15 min @ 25℃
5 min @ 65℃
Hold on 4℃

Adaptor连接DNA片段的选择性回收：
  构建不同大小的DNA文库时，需进行DNA片段的选择性回收。若起始样本量低于50ng，不建议进行DNA片段选择性回收。可参考另一种方案，直接进行DNA片段的纯化。建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)进行DNA片段选择性回收。若使用除百奥莱博以外厂家的磁珠，需自行摸索最佳磁珠用量。以下操作步骤采用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒，可选择回收DNA片段长度范围为310-370bp(读长为200bp)，反应起始体积为100μl。
1、涡旋振荡MCPure 20秒，使其彻底混匀为均一溶液；
2、将100μl adaptor连接反应缓冲液转移至一新的1.5ml离心管中；
3、加入60μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟；
4、短暂离心，将离心管置于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心地将上清溶液转移至新的1.5ml离心管中,并弃去磁珠；
注意：不要弃除上清。
5、向上清中加入20μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温放置5分钟；
6、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心移取上清并弃除，期间避免接触结合目标DNA的磁珠；
注意：不要弃除磁珠。
7、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清；
8、重复步骤7；为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
9、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥；
10、将离心管从磁力架上取下，加入25μl 10 mMTris-HCl(pH 8.0)或去离子水(自备)，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟；
11、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中；

另一种方案：Adaptor连接DNA片段的全部回收：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、将adaptor连接反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后，室温静置5分钟。
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心吸取上清并弃除，期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意：不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5。为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入25μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟。
9、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中。

PCR富集：
1、在PCR管中加入以下试剂并混匀：

试剂	体积
连接adaptor后的DNA片段	20μl
2×HiFidelity PCR Mix	25μl
10×Primer Mix(5μM each)	5μl
总体积	50μl

2、PCR反应条件：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30s
变性	98℃	10s	4～12个循环
退火	65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5min

注：样本量为1ug时，4-6个cycles，样本量100ng时6-8个cycles，样本量为10ng时10-12个cycles。PCR循环数可根据实验进行优化。

PCR产物的纯化：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液；
2、将PCR反应液转移至一新的1.5ml离心管中；
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟；
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)。小心移取上清并弃除，期间避免接触结合目标DNA的磁珠；
注意：不要弃除磁珠
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5；为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入25μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟，短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中，DNA文库在-20℃保存。

储存条件：-20℃


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K13200 补体成分5受体1抗体 Rabbit Anti-C5R1 antibody
K16552 G蛋白信号调节蛋白1抗体 Rabbit Anti-GPSM1 antibody
Q05158 CXCL2/MIP-2抗体 Anti-GRO beta Antibody(Rabbit Polyclonal antibody)
K24428 磷酸化视网膜母细胞瘤相关蛋白p130抗体 Rabbit Anti-phospho-Rb2 p130 (Ser952) antibody
K15326 EMB蛋白抗体 Rabbit Anti-Embigin antibody
K18678 A型流感病毒核输出蛋白抗体 Rabbit Anti-Influenza A Nuclear export protein antibody
KFS397 kFluor430标记山羊抗兔IgG(H+L) keyFluor430 Goat anti-Human IgG(H+L)
K26554 跨膜蛋白111抗体 Rabbit Anti-TMEM111 antibody
Q01535 RBP4抗体 Anti-RBP4 Antibody(Rabbit Polyclonal antibody)
K20804 线粒体核糖体蛋白S18A抗体 Rabbit Anti-MRPS18A antibody
K11703 金属肽链内切酶抗体 Rabbit Anti-CD10 antibody
Q00308 DR6/TNFRSF21抗体 Anti-DR6 Antibody(Rabbit Monoclonal antibody)
Q03661 Tetranectin/CLEC3B抗体 Anti-Tetranectin Antibody(Rabbit Polyclonal antibody)
K22931 磷酸化蛋白激酶C抗体 Rabbit Anti-phospho-PRKCA(Thr637) antibody
K13829 软骨寡聚基质蛋白抗体 Rabbit Anti-COMP antibody
Q02434 TNF-α/TNFA/TNFSF2抗体 Anti-TNF-alpha Antibody(Mouse Monoclonal antibody)
Q05787 WAP5/WFDC2/HE4抗体 Anti-HE4 Antibody(Rabbit Polyclonal antibody)

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