北京现货Ni琼脂糖凝胶怎么卖

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京现货Ni琼脂糖凝胶怎么卖，产品信息：

类别：蛋白质研究

英文名：Ni-Agarose Resin

产品名	产品编号	包装规格
Ni琼脂糖凝胶	WE0272	10ml

编号：WE0272

规格：10ml

英文名：Ni-Agarose Resin

品牌：百奥莱博

产地：北京

  该镍柱纯化系统对6×His-tag蛋白具有显著特异吸附能力，能够高效一步纯化带有6个组*酸亲和标签的蛋白。该系统具有4个Ni2+螯合位点，较只有3个螯合位点的Ni-IDA结合Ni2+更为牢固，有效防止纯化过程中Ni2+脱落且增强对His标签蛋白的结合能力，提高纯化效率。较高的基团密度，大大提高了蛋白载量。该系统在天然或变性条件下，对来源于各种表达系统(如杆状病毒，哺乳细胞，酵母以及细菌)中的His标签蛋白，均有很好的纯化效果。本产品已螯合镍离子，可直接使用，方便，快捷。

 

支持物：CL-6B琼脂糖凝胶

载量：20-30 mg His标签蛋白/ml填料

粒径：50-160μM

 

注意事项：

1、缓冲液中不建议使用 β-巯基乙醇、DTT或EDTA。

2、整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。

3、为提高纯化效率，首先确定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的最佳使用浓度。可以使用线性或梯度浓度的咪唑(20-500 mM)洗脱蛋白，并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。

4、为避免柱子被堵塞，请使用高纯度的试剂配制缓冲液，并通过0.45μM过滤器过滤。建议将裂解液进行离心，或者使用0.45μM过滤器过滤。

5、柱再生时，保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。

 

使用方法：

 

I 缓冲液的准备

1、可溶性蛋白纯化缓冲液配方：

 

成分	Tris-HCl(PH 7.9)	咪唑	*化*
Soluble Binding Buffer	20 mM	10 mM	0.5 M
Soluble Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M

2、包涵体蛋白纯化缓冲液配方：

 

成分	Tris-HCl(PH 7.9)	咪唑	*化*	尿素/盐*(代"酸")胍
Inclusion Body Binding Buffer	20 mM	5 mM	0.5 M	8 M/6 M
Inclusion Body Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M	8 M/6 M

 

II 组装层析柱

1、将Ni-Agarose Resin填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。

注意：

1)填料的上层是乙醇保护层，将填料和乙醇一起混匀，以每ml填料纯化20-30mg His标签蛋白计算，取需要的填料与乙醇的混合液加入层析柱。

2)本实验是通过重力作用使溶液流出，如果溶液不流出，可以给柱子一个外力，例如用大拇指对柱口轻轻按压一下，迫使其流出。

2、向装填好的柱中加入5倍柱体积的去离子水将乙醇冲洗干净后，再用10倍柱体积的Binding Buffer平衡柱子，平衡结束后即可上样。

注意：柱体积指的是填料的体积。

 

III 可溶性蛋白的纯化

1、收集菌体后，每100 mg菌体(湿重)加入1-5ml细菌裂解液，超声裂解菌体。10000×g离心10分钟后，收集上清。

2、将上清液过柱，流速为10倍柱体积/小时。

3、使用15倍柱体积的Soluble Binding Buffer冲洗柱子，收集流穿峰。

4、使用5倍柱体积的Soluble Elution Buffer洗脱，收集洗脱峰。

5、洗脱后，依次使用3倍柱体积的Soluble Binding Buffer和5倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，封柱后2～8℃保存。

 

Ⅳ 包涵体蛋白的纯化

1、收集菌体后，每100 mg菌体(湿重)加入1-5ml 细菌裂解液，超声裂解菌体。

2、离心，弃上清，将沉淀重悬于Soluble Binding Buffer 中(如有需要，可进行超声波处理，超声前可加入1-5 mM 磷酸酶抑制剂混合物)。

3、重复操作2，直至包涵体清洗干净(呈较洁净的乳白色状)。

4、将沉淀重悬于Inclusion Body Binding Buffer中，冰浴1小时，使包涵体溶解。

5、10000×g离心20分钟，将上清以孔径为0.45μM的滤膜过滤。

6、将蛋白溶液负载上柱，流速为10倍柱体积/小时。

7、使用15倍柱体积的Inclusion Body Binding Buffer冲洗柱子，收集流穿峰。

8、使用5倍柱体积的Inclusion Body Elution Buffer洗脱，收集洗脱峰。

9、洗脱后，依次使用3倍柱体积的Inclusion Body Binding Buffer和5倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，封柱后2～8℃保存。

注意：在纯化包涵体蛋白时，所有缓冲液均含有变性剂，需要降低Binding Buffer中的咪唑浓度(5 mM或更低)。洗脱时，若蛋白在较高pH下洗脱失败，可以选用低pH缓冲液作为洗脱缓冲液(pH6.5，pH5.9或pH4.5)。

 

Ⅴ 柱再生

当填料使用多次后，结合效率会有所下降(表现为流速变慢或填料失去蓝绿色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。

1、使用2倍柱体积的6M盐*(代"酸")胍冲洗后，使用3倍柱体积的去离子水冲洗。

2、使用1倍柱体积2% SDS冲洗。

3、依次使用1倍柱体积的25%、50%、75%和5倍柱体积100%乙醇冲洗，再依次使用1倍柱体积的75%、50%、25%的乙醇冲洗。

4、使用1倍柱体积的去离子水冲洗。

5、使用5倍柱体积含50 mM EDTA缓冲液(PH8.0)冲洗。

6、使用3倍柱体积去离子水，3倍柱体积20%乙醇冲洗。

7、封柱后2～8℃保存。

8、再次使用前，需首先使用10倍柱体积去离子水冲洗，然后使用5个柱体积的50 mM NiSO4再生，3个柱体积的Binding Buffer平衡。

 

储存条件：2～8℃，避免冷冻

北京现货Ni琼脂糖凝胶怎么卖专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：Ni-Agarose Resin,WE0272,Ni琼脂糖凝胶

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