WE0126型防污染多重PCR MasterMix(含UNG

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WE0126型防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶)促销由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶)等核酸扩增(PCR)产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：WE0126型防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶)促销
编号：WE0126
规格：1ml
英文名：Multiplex PCR MasterMix(UNG)
品牌：百奥莱博
产地：北京
  本品是由BaldStar Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs(含dUTP)、UNG酶以及PCR稳定剂等组成的PCR预混体系。使用本产品无需进行繁杂的PCR反应条件的优化过程，只需进行简单的条件摸 索即可轻松进行多重PCR反应。
  本产品所含的BaldStar Taq DNA Polymerase是经化学修饰的热启动酶，可以有效 减少PCR反应初期因引物错配而产生的非特异扩增。独特的缓冲体系，使多重PCR反 应所有的引物都能有效延伸，无需额外优化。此MasterMix中还包含GC Enhancer，有 助于实现“困难”模板(比如，高GC含量的模板)的高效扩增。本产品运用dUTP-UNG 防污染系统，可有效去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导 致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU 碱基PCR产物的形成。
  本品可有效防止PCR产物的残留污染，适用于防污 染多重PCR反应，比如微卫星分析、基因分型和SNP检测等。


WE0126型防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶)促销正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·FITC标记驴抗山羊IgG(H+L)
编号：WE0364
英文名称：Donkey Anti-Goat IgG, FITC Conjugated
规格：100μl
本产品为FITC标记的经亲和纯化的驴抗体，特异识别山羊IgG，检测灵敏度高，本底低，对其他种属IgG无明显交叉反应，常用于免疫荧光和流式细胞等标记检测。FITC即硫*酸荧光素，为一种常用荧光染料，常用于免疫荧光和流式细胞检测等多标记检测。经本荧光抗体染色的标本，在荧光显微镜下观察呈现明亮的绿色荧光。

免疫原：山羊IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：对于大多数实验(1：50-200)

·抗MBP标签单克隆抗体
编号：WE0338
英文名称：Anti MBP-Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：20μl|100μl
该抗体为高纯度的鼠单克隆抗体，与MBP结构域具有高亲和性，可灵敏特异地检测各种MBP编码载体表达的MBP-Tag融合蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：全长MBP蛋白
应用范围：WB(1：500-5000)、ELISA(需摸索最佳稀释度)

·无内毒素质粒中提试剂盒
编号：WE0166
英文名称：NoEndo Plasmid Midi Kit
规格：50次
  内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。本试剂盒提供一种简单、快捷、高效提取无内毒素质粒的新方法，提取的质粒最大限度去除内毒素，并能有效去除基因组DNA、RNA、蛋白等污染。

  本试剂盒通过碱裂解法裂解细胞，新型硅基质膜高效专一的结合质粒DNA，同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤柱，有效去除内毒素、蛋白等杂质。由本试剂盒所得质粒纯度高、质量稳定，特别适用于细胞转染，同时也可用于DNA测序，PCR，基于PCR的突变，体外转录，转化细菌，内切酶消化等下游实验。

试剂盒组成：

 

组份	50次
Buffer P1	30ml
Buffer P2	30ml
Buffer E3	30ml
Buffer PS	15ml
Buffer PW(浓缩液)	10ml
Endo-Free Buffer EB	10ml
RNase A(10 mg/ml)	600μl
过滤柱FM及收集管	50套
吸附柱DL及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇、异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2～8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、注意不要直接接触Buffer P2和Buffer E3，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。

操作步骤：
1、取5-15ml过夜培养的菌液，加入离心管(自备)中，13000rpm(~～～16200×g)离心1分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入500μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入500μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀8-10次，使菌体充分裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
4、向离心管中加入500μl Buffer E3，立即上下颠倒混匀8-10次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。13000rpm离心5分钟，吸取上清，将上清加入过滤柱FM中(已装入收集管)，13000rpm离心1分钟过滤，将收集管中的滤液转移到离心管(自备)中。
注意：
1)Buffer E3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
2)吸附柱的最大容积为750μl，所以上清液请分两次过滤，并混合于同一自备离心管中。
5、向滤液中加入450μl异丙醇，上下颠倒混匀。
6、柱平衡：向已装入收集管的吸附柱中加入200μl Buffer PS，13000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。
8、13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：吸附柱的最大容积为750μl，所以第5步中所得溶液分多次过柱。
9、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
10、将吸附柱重新放回收集管中，13000rpm离心1分钟。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附膜的中间部位加入100-200μl Endo-Free Buffer EB，室温放置2-5分钟，13000rpm离心2分钟。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，13000rpm离心2分钟。Endo-Free Buffer EB在65-70℃水浴预热，适当延长吸附和洗脱的时间，可以增加提取效率。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Endo-Free Buffer EB在65-70℃水浴预热，可以增加提取效率。

储存条件：室温(15～30℃)


WE0126型防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶)促销关键词：防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶),Multiplex PCR MasterMix(UNG),WE0126


·RIPA裂解液(强)
编号：WE0258
英文名称：RIPA Lysis Buffer(Strong)
规格：100ml
  RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可以分为强、中、弱三类，具体特点和差异请参考附表2，可根据实验需求选择相应产品。RIPA裂解液(强)可以有效提取细胞核、细胞膜和胞浆蛋白，提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。
  RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1%Triton X-100，1% sodiu*(代"m") deoxycholate，0.1% SDS以及sodiu*(代"m") orthovanadate，sodiu*(代"m") fluoride，EDTA，leupeptin等。


注意事项：
1、为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。
2、使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，以测定蛋白浓度。产品可单独向本公司订购，如：WE0276 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂，不能用Bradford法进行蛋白定量。
3、建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购，如：WE0259 蛋白酶抑制剂混合物，WE0256 磷酸酶抑制剂混合物。
4、若需获得更高浓度的蛋白，应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。
5、对于培养瓶中的贴壁细胞，推荐先使用常规方法消化细胞，再参考悬浮细胞蛋白提取步骤操作。
6、对于离心获得的细胞，若不确定细胞体积，可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用量。如5×106个Hela细胞约需加入500μl RIPA裂解液，以此类推。

使用方法：

一、细胞样品
贴壁细胞蛋白抽提
1、小心倾去贴壁细胞的培养液。
2、可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请先使用预冷的PBS漂洗细胞。
3．加入适量RIPA Lysis Buffer(Strong)(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂)，试剂使用量请参考附表1，在冰上用枪头吹打贴壁细胞。

表1 贴壁细胞RIPA 裂解液使用量推荐表

细胞培养板类型或培养面积	RIPA 裂解液使用量
100 mm	500-1000μl
60 mm	250-500μl
6孔培养板	200-400μl /孔
24孔培养板	100-200μl /孔
96孔培养板	50-100μl /孔

4、将裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
5、14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

悬浮细胞蛋白提取
1、悬浮细胞，2,500×g离心5分钟，弃去上清。
2、可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请使用PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5分钟，弃去上清。
3、加入适量RIPA Lysis Buffer(Strong)(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂)，每5×106细胞加入约200-500μl RIPA Lysis Buffer(Strong)，吹打均匀。
4、冰上放置20分钟，使细胞充分裂解。
5、14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

二、组织样品
1、取适当的RIPA Lysis Buffer(Strong)，在使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂。
2、称量实验组织的重量，按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA Lysis Buffer(Strong)后将组织剪成细小碎片，用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3、冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
4、14000×g 离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为基因组。

表2 蛋白裂解液性能、参数比较
 

目录号	WE0258	WE0257
名称	RIPA裂解液(强)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)	SDS裂解液
裂解强度	强	中	温和	强
有效裂解成分	1%Triton X-100， 1%脱氧胆酸*, 0.1% SDS	1% NP-40， 0.5%脱氧胆酸* , 0.1% SDS	1% NP-40， 0.25%脱氧胆酸*	1%SDS
膜蛋白提取	很好	较好	一般	很好
胞浆蛋白提取	很好	很好	很好	很好
核蛋白提取	很好	较好	较好	很好
主要用途	WB，IP	WB，IP	WB，IP，CO-IP	WB，CHIP

储存条件：2～8℃


WE0126型防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶)促销关键词：防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶),Multiplex PCR MasterMix(UNG),WE0126


·植物RNA提取试剂盒(含DNase I)
编号：WE0200
英文名称：RNAtiqu Plant RNA Extraction Kit(DNase I)
规格：50次
  本试剂盒用于从各种植物中提取纯化高品质总RNA，也适用于真菌菌丝RNA的提取。独特的Shredder分离柱，用于匀质化和过滤高粘度的植物或真菌裂解物，同时采用硅基质膜吸附RNA进行纯化，使多聚糖等各种污染物通过洗涤被有效去除，经洗脱的RNA可直接用于各种下游实验。由本试剂盒提取RNA分子量大于200碱基，纯度高，几乎无DNA残留。如果是对微量DNA非常敏感的RNA实验，残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除。提取的RNA可用于Northern Blot、Dot Blot 、RT-PCR和体外翻译等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
DNase I	1000 U
10×Reaction Buffer	1000μl
Buffer RL	35ml
Buffer RLC	35ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
过滤柱FL及收集管	50套
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
② 配制溶液应使用无RNase的水。
③ 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
② 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
③ 配制溶液应使用无RNase的水。
④ 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
3、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取的量和质量。
4、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇，1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。Buffer RLC使用时不需加β-巯基乙醇。
5、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
6、Buffer RL和Buffer RLC如果产生沉淀，请加热使其溶解后室温放置。
7、所有离心步骤均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：
1、50-100 mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末，加入600μl Buffer RL(使用前检查是否加入β-巯基乙醇)或Buffer RLC。涡旋振荡使其充分裂解。
注意：
① Buffer RL主要成分为异硫*酸胍，适用于大多数植物组织的裂解。但有些植物组织(如玉米的胚乳)，由于次级代谢产物较特殊，异硫*酸胍使样品产生沉淀，导致RNA提取效果不佳，此时可加入Buffer RLC替代Buffer RL。
② 56℃孵育1-3分钟有助于组织的裂解，但是淀粉含量高的植物不要进行高温孵育。
2、将步骤1所得全部液体转移至已装入收集管的过滤柱中，12000rpm(~～13400×g)离心2分钟，将收集管中的上清液转移到一个新的离心管(自备)中。
注意：
① 在吸取液体时可以将枪头尖端剪掉，便于取样。
② 过滤柱FL可以除去大部分的碎片，但仍会有小部分流出，离心后会在收集管内形成沉淀，在进行下一步时注意避免吸到沉淀。
3、在步骤2所得干净的裂解液中加入0.5倍体积的无水乙醇，迅速混匀。
注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，但不影响后续试验。
4、将上步得到的溶液转移到已装入收集管的吸附柱中,若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入; 12000rpm离心15秒，弃掉废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1, 12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心15秒,弃废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心1分钟，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中的无水乙醇。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱装入新的离心管中，向吸附膜的中间加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
① RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
② 如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
③ 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。

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