北京一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗)报价

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗)报价在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗)报价
编号：WE0297
规格：50次
英*(代"文")名：One Step Western Kit HRP(Mouse)
品牌：百奥莱博
产地：北京
  本试剂盒是百奥莱博研发的Western Blot检测试剂盒，1小时左右能够得到高质量的Western Blot结果，且操作简便、检测灵敏度高、背景低、不需再加入二抗、系统稳定性强。常规Western Blot间接法检测过程(封闭、一抗结合和二抗结合)需要较长的时
间，实验流程复杂且需要多步条件优化。胶上的蛋白转移到载体膜上后，使用试剂盒中的封闭液孵育5 min，再用抗体反应液处理后的一抗孵育载体膜，经洗涤三次(每次5 分钟)后，即可进行发光或显色检测。本试剂盒针对目的蛋白一抗为鼠来源的实验系统使用。

组份	50次
Blocking Buffer	500ml
Antibody Pretreat Solution(HRP/Mouse)	5×1ml
Dilution Buffer	500ml
Wash Buffer(10×)	500ml

注意事项：
1、客户自己准备鼠来源的一抗。
2、使用Blocking Buffer封闭液、Antibody Pretreat Solution(HRP/Mouse)抗体反应液(鼠)、Wash Buffer(10×)漂洗液之前请充分混匀。
3、漂洗液如在2-8℃保存时出现沉淀，请恢复到室温，把沉淀溶解后正常使用，1×漂洗液可在室温保存一个月。
4、建议转膜完成后用丽春红等试剂染色，并把膜上多余部分剪去以增加试剂的使用效率。
5、一抗和抗体反应液HRP(鼠)需要通过预实验来确定最佳的稀释用量。
6、抗体反应液HRP(鼠)、抗体稀释液和抗体用量可根据膜的大小按比例放大或减少。
7、加入一抗的抗体稀释液可以回收重复使用一次。特异性及亲和力不好的抗体建议不重复回收使用。回收后抗体如在1-2天内使用放置在2～8℃，长期保存请在-20℃冻存，避免多次反复冻融。
8、如果存在较高背景的情况，请调整抗体的用量，并增加洗膜次数。
9、试剂盒内所有试剂请于2～8℃保存，避免冻融。

操作步骤：
本产品适用于转膜完成后的封闭及抗体孵育步骤，以5cm×8cm 膜为例：

1、漂洗液准备：取10ml Wash Buffer(10×)用蒸馏水稀释至100ml，即为1×Wash Buffer，待用。每次洗膜用8-10ml。
2、封闭：转膜完成后，将膜浸没到10ml Blocking Buffer中，室温封闭5分钟。
3、漂洗：倒掉封闭液，加入8-10ml 1×Wash Buffer，于摇床上用较大速度漂洗1分钟。
4、洗膜的同时可准备抗体孵育液：取Antibody Pretreat Solution(HRP/Mouse)100μl到离心管中，加入鼠源一抗3-10μg，枪头吸打至充分混匀，室温孵育5分钟。加入至10ml Dilution Buffer中，充分混匀。
注意：
1)一抗的用量也可根据抗体的稀释度来进行调整。以抗体的最终稀释度1:1000为例，取100μl抗体反应液HRP(鼠)到EP管中，加入10μl一抗，加入到10ml 抗体稀释液中，充分混匀，室温孵育5分钟。
2)如果膜面积较小，可按比例减少抗体、反应液及稀释液的用量。
5、完成步骤3后，倒掉漂洗液，将一抗、Antibody Pretreat Solution(HRP/Mouse)及Dilution Buffer混合而成的抗体孵育液加到膜上(确保孵育液完全浸没膜表面)，在摇床上以60 rpm左右的速度室温孵育40分钟。
6、弃去(回收)抗体孵育液，用配制的1×Wash Buffer漂洗3-5次，每次3分钟。
7、进行后续检测。建议采用ECL或者DAB法进行检测。

应用实例：

实例一 抗原为293T细胞全裂解液
A：普通WB对照：beta-actin鼠单抗(WE0354)5μg室温孵育40 min，洗膜后二抗羊抗鼠-HRP(WE0393)1：10000稀释，室温4 0min，ECL(WE0308)曝光。
B: 一步法WB： beta-actin鼠单抗(WE0354)5μg室温孵育40 min，ECL(WE0308)曝光。
实例二 抗原为E.coli多标签蛋白裂解液
C：普通WB对照：GST鼠单抗(WE0352)2.5μg室温孵育40 min，洗膜后二抗羊抗鼠-HRP(WE0393)1：10000稀释，室温40 min，ECL(WE0308)曝光。
D：一步法WB： GST鼠单抗(WE0352)2.5ug 室温孵育40min ， ECL(WE0308)曝光。

常见问题及解决方法：

问题	可能原因	解决方案
信号太弱或者 看不到条带	蛋白上样量太少	进行SDS-PAGE电泳时加大上样量。
	蛋白转膜效率太低	优化转膜时间或者电流，确保转膜时膜与胶之间没有气泡。
	一抗亲和力较低	增加膜在溶液中的孵育时间或者增加抗 体浓度可以增加信号
	一抗亲和力较低	对于低亲和力抗体来说，减少洗膜时间可以增加信号。由每次10 分钟，减少到每次5分钟可以增加信号。
背景偏高	一抗使用过量	减少一抗的使用量。
	一抗有非特异性结合或者 与封闭试剂有交叉反应	使用和二抗来源一致的血清或者无IgG的BSA。
	洗膜时间太短	增加洗涤的步骤可以进一步的降低背景。
	曝光显影时间过长	减少曝光时间。如果信号和背景都高，可以等待一段时间 ，等背景信号减弱后，再进行曝光。
	容器或者试剂被污染	每次洗涤的时候使用清洁的容器。带手套，使用清洁的镊子处理膜。

储存条件：2～8℃保存，避免冷冻

北京一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗)报价极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(低含量ROX校正染料)
编号：WE0155
英*(代"文")名称：BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG)(Low ROX)
规格：5ml
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含 BaldStar Taq DNA polymerase、PCR Buffer、dNTPs(dTTP全部被dUTP所取代)、UNG酶和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP基因型分析等。本产品中运用了dUTP-UNG防污染系统，在PCR反应体系配制过程中加入了dUTP，因此就形成了含有dU碱基的扩增产物。而此产物可以在下次进行PCR反应前，由PCR体系中的UNG酶处理消除。这样就有效的去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU碱基PCR产物的形成。本品含有的 BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的 PCR缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，可以检测单拷贝的模板。使用本产品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0154)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0155)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0156)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

组份	WE0154-5ml	WE0155-5ml	WE0156-5ml
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。


使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

两步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。

三步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火	55℃-65℃	30s
延伸	72℃	30s

储存条件：-20℃，避免反复冻融


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·2×BAmp MasterMix(含染料)
编号：WE0106
英*(代"文")名称：2×BAmp MasterMix(With Dye)
规格：5ml
  BAmp MasterMix由BAmp DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。BAmp DNA Polymerase是一种兼具高扩增效率和高保真性的耐热聚合酶。其主要特点是可以高效扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段方面，其优势更加明显，所扩增的片段最长可以达到40 kb。该酶具有高度的延伸和校对能力，保真度高于普通Taq酶。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。适用于构建基因图谱、序列测定及分子遗传学研究等。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×BAmp MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×BAmp MasterMix含有BAmp DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BAmp MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，BAmp DNA Polymerase的扩增效率为2.0 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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