BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+U

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶) 核酸扩增(PCR)在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶) 核酸扩增(PCR)
编号：WE0154
规格：1ml|5ml
英*(代"文")名：BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG)
品牌：百奥莱博
产地：北京
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含 BaldStar Taq DNA polymerase、PCR Buffer、dNTPs(dTTP全部被dUTP所取代)、UNG酶和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP基因型分析等。本产品中运用了dUTP-UNG防污染系统，在PCR反应体系配制过程中加入了dUTP，因此就形成了含有dU碱基的扩增产物。而此产物可以在下次进行PCR反应前，由PCR体系中的UNG酶处理消除。这样就有效的去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU碱基PCR产物的形成。本品含有的 BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的 PCR缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，可以检测单拷贝的模板。使用本产品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0154)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0155)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0156)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

 

组份	WE0154-5ml	WE0155-5ml	WE0156-5ml
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。


使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

两步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。

三步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火	55℃-65℃	30s
延伸	72℃	30s

储存条件：-20℃，避免反复冻融

BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶) 核酸扩增(PCR)正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：
HR0430 Caspase 8 活性检测试剂盒 Caspase 8 activity assay kit
BTN100212 一管式点突变试剂盒 One-Tube Mutagenesis Kit
SV0477 MluI-HF限制性内切酶 MluI-HF Restriction Endonuclease
SY0493 罗丹明123 Rhodamine 123
KFS253 Hoechst 33342/PI双染试剂盒 Apoptotic Cell Hoechst 33342/PI Detection Kit
" Carboxy benzyl penicillin solution
SV1339 SP6 RNA 聚合酶
BTN51203 非酶RNA清除剂1.0 Non-enzymatic RNA scavenger 1.0
WE0309 TMB底物显色试剂盒(可溶型，20×) Soluble TMB Kit(20×)
YT582 N-*甲酰基-D-*基酸酰胺水解酶 N-Carbamoyl-D-Amino-Acid Hydrolase (Crude Enzyme)
ALH379 新型蛋白染色试剂盒(替代考马斯亮蓝染色) Novel protein staining kit
BTN120695 新生霉素溶液 Novobiocin Sodium Solution
YT321 HDAC抑制剂(组蛋白去乙酰化酶抑制剂)(丁酸*)(Sodium Butyrate) Histone Deacetylase Inhibitor
SY0235 腔肠素h Coelenterazine h
KFS009 免疫染色封闭液 Immunol Staining Blocking Buffer
BTN130651 DNA促旋酶 DNA Gyrase(E.coli)
BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶) 核酸扩增(PCR)关键词：BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG),WE0154,BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)

KFS354 ATP酶测试盒(组织及细胞膜需高速离心)
SV0206 BspCNI限制性内切酶 BspCNI Restriction Endonuclease
SV1499 肽 N-糖苷酶 F（无甘油）
BTN90308 亲和硅烷 Binding Silane
YT075 DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒 DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit
SV1078 RecJf 核酸外切酶 RecJf exonuclease
HR0159 叶绿体蛋白提取试剂盒 Chloroplast protein extraction kit
BTN131044 辛甲基β葡糖苷 Octyl-β-Glucoside
YT430 IPTG干粉(蓝白斑筛选用)(诱导表达用) IPTG
ALH041 酵母RNA提取试剂盒 Yeast RNA rapid extraction kit
KFS112 油红染色试剂盒
BTN60605 20%PVP K30溶液(不含RNase) RNase-free PVP K30
SY0137 RORα2-Luc荧光素酶报告基因质粒 RORα2 Luciferase Reporter Plasmid
BTN131191 96孔板病毒RNA提取试剂盒(真空法) Virus RNA extraction kit with 96-well plate(Vacuum method)
WE0165 酵母质粒提取试剂盒 Yeast Plasmid Extraction Kit 
SV0491 MseI限制性内切酶 MseI Restriction Endonuclease
SY0498 Hoechst 33258 染液(即用型)
BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶) 核酸扩增(PCR)关键词：BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG),WE0154,BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)


·EDTA缓冲液(IHC抗原修复液，50×)
编号：WE0319
英*(代"文")名称：EDTA Buffer(50×)
规格：100ml
  福尔马林固定时，组织中的许多*基酸残基形成醛键、羧甲键而封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联也使抗原决定簇隐蔽。因此，对于石蜡切片，要求在进行IHC染色前，先进行抗原修复，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，恢复抗原的原有空间形态。EDTA缓冲液是除柠檬酸缓冲液外另一种常用的IHC 抗原修复液。有部分抗原用EDTA缓冲液修复效果好于柠檬酸缓冲液。

注意事项：
1、请使用足量的修复液，修复过程中保证组织切片完全浸没在修复液中。
2、使用沸水浴或高压修复时，操作请务必谨慎，尤其高压修复时，保证锅内有足量的修复液，以防止干烧。
3、推荐的修复时间为达到理想修复效果所需时间，如组织粘片不牢，容易掉片，请酌情减少修复时间。

操作步骤：

1、高压热修复：根据需要量，取适量本品，稀释50倍后即可使用。将稀释好的修复液加入高压锅内，将待修复切片浸于其中，保证修复液没过组织(最好将切片浸入盛修复液的塑料容器内，再置于锅内修复液浴中)，盖上压力锅盖，加热至均匀喷汽，从喷汽开始计时，1~2 分钟后压力锅离开热源，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水冲洗后，再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次，每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。此方法修复强度最大，是最常用的热修复法。

2、微波热修复：根据需要量，取适量本品，稀释50倍后即可使用。将切片放入盛有修复液的容器中，置微波炉内加热至沸腾，停止加热，使容器内液体温度下降保持在95℃~98℃之间并持续 10~15分钟(注意：请根据具体机型酌情设置条件，务必满足以上步骤中对温度和时间的要求)。取出容器，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水冲洗后，再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次，每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。此方法修复强度大于沸水浴，但小于高压修复。

3、沸水浴热修复：根据需要量，取适量本品，稀释50倍后即可使用。将待修复切片完全浸入盛有修复液的容器中，并将此容器置于盛去离子水的大器皿水浴中，电炉上加热煮沸，从修复液的温度到达95℃起开始计时15~20分钟。让切片在修复液中自然冷却至室温，蒸馏水冲洗，再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次，每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。该方法效果较微波和高压修复差。

储存条件：2～8℃

我公司正在优惠促销核酸扩增(PCR)等系列产品，期待您的咨询选购BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶) 核酸扩增(PCR)。