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HG TaqMan miRNA
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21
2 年
上海西格
-20°C
100TX20μl
描述:HG TaqMan miRNA 定量PCR 试剂盒, 采用特异性的正向 miRNA 引物和接头引物进行 PCR 扩 增,检测荧光基团采用 FAM 标记的特异性 miRNA TaqMan 探针(原理见图 1)。使用该试剂盒可以特异性、 高灵敏度的检测低至 100 个细胞的 miRNA 分子。 的 TaqMan miRNA 定量 PCR 试剂盒共有一万 余种,每一个 mircoRNA 分 子对应一个检测试剂盒(包含特异性的 TaqMan 探针、正 向引物、反向引物、定量试剂),可在 HG TaqMan miRNA qPCR kit.xls 中查询。如果您研究的 mircoRNA 分子不在 我们的列表中,请来信咨询,我们将及时给您优化设计。 内参基因可选择使用: (1)TaqMan RNU6B miRNA 定量 PCR 试剂盒适用于人、鼠等哺乳动物组织、细胞样品; (2)TaqMan hsa-miR16 miRNA 定量 PCR 试剂盒适用于来源于人、鼠全血样品。
组分:储存:避光置于-20°C,可保存 2 年;避免反复冻融1 配制反应体系(20μl)5×Golden HS TaqMan qPCR Mix 4 μl20×miRNA TaqMan Assay 1 μl*cDNA 模板 1~2.5 μlddH2O Up to 20 μl2 进行 Real-Time PCR 反应通常采用两步法,程序如下: Stage 1: 95℃ 15 min(热启动,不可缩短时间) Stage 2: 95℃ 10 s 60℃ 30 s 40cycles(收集信号采用 FAM 染料通道,Rox 矫正信号选择 None)3 反应结束后确认 Real-Time PCR 的 cDNA 样品和 NTC阴性对照的扩增曲线。
PCR反应基本步骤:一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:变性(Denaturation):利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。退火或称接合,复性(Annealling):在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。延伸(Extension):DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。 PCR 反应需要使用哪些试剂?一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物; 公司供应的相关产品:
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