超级杂交液(芯片)厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

超级杂交液(芯片)厂家的品牌：百奥莱博，是优质的探针标记及检测产品，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多超级杂交液(芯片)等探针标记及检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：超级杂交液(芯片)厂家
编号：BTN130905
规格：10mL
英文名：Super hybrid solution(chip)
品牌：百奥莱博
产地：北京
基因芯片是将大量靶基因(DNA片段)有序地、高密度地点在玻璃片或硅片或塑料片上等载体上所形成的矩阵。基因芯片杂交一般情况下是将待测的两种样品(主要是RNA样品)分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记，制备成探针与芯片杂交，杂交信号用激光扫描仪检测，计算机分析检测结果，可获得类似与传统的点杂交的杂交数据，以达到快速、高效、高通量及平行性的分析表达谱的目的。本产品为即用型芯片专用的杂交液，可用于各种标记的探针(主要是Cy3和Cy5标记的RNA探针)跟基因芯片的杂交实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
一、预杂交(下面的操作以载玻片为例)
 预杂交的主要作用是在加入标记探针之前从载玻片上洗去未结合的靶基因(靶DNA)，同时封闭载玻片表面可能与标记探针进行非特异性结合的反应性基团(如自由*基)，从而降低非特异的背景。所有的预杂交、杂交、杂交后洗涤都在Coplin染缸或者显微镜载玻片盘等杂交盒中进行。
1.在室温下，将载玻片浸入装有本产品的杂交盒中(本产品的用量根据杂交盒的大小决定，以能够浸埋载玻片为准)。将杂交盒在42℃水浴中放置30～45分钟，无需震动。
2.在室温下用去离子水清洗载玻片数次。
3.(可选)用100%异丙醇(HPLC级)漂洗载玻片。
4.在加入杂交溶液之前，空气晾干或者通过离心(室温下以2000g离心5分钟，有阵列的一面朝外)干燥载玻片，将干燥后的载玻片立即用于杂交。如果载玻片干燥时间超过1小时，杂交效率可能会迅速下降。
二、杂交
1. 将等同于至少1μg polyA RNA或100μg总RNA的Cy3和Cy5标记的探针RNA混合在一起，最终体积约为6μL。如果没有这么多的，则需要进行RNA扩增。
2. 将6μl标记DNA和30μL本产品在塑料离心管中混合，得到杂交液。
3.(可选)将杂交液在微量离心机中10,000 g离心5分钟，然后将上清液转移到新的塑料离心管中。本步骤以去除靶序列纯化过程中带入的微量玻璃纤维和其他高分子质量的颗粒。
4. 将上清液在100℃下加热2分钟，然后在30℃水浴中冷却30秒。加热混合液可以降低背景。不要将溶液放置在冰上，因为可能会有沉淀析出。
5. 将适量的杂交溶液加到DNA微阵列上，再小心的盖上盖玻片，盖玻片和DNA微阵列之间不能有气泡。
6. 将载玻片置于一个空的移液器吸头盒的上层，下层装5mL自备的3×SSC，盖上盖子即得潮湿的环境。由于杂交是在很小的体积下进行的，在密闭的潮湿保持适当的杂交适度非常重要，过分干燥则盖玻片会粘附在DNA微阵列上，背景会很高；过于潮湿则冷凝的液体会进入盖玻片区域，降低杂交信号。
7.在42℃下将载玻片温育14~16小时。
三、杂交后的清洗
 注意在下面的所有操作过程中，一定不要让载玻片干燥。
1.杂交完毕，拆卸杂交盒。如果杂交盒是浸入水浴中的，在松开螺丝之前，仔细擦干水痕，尤其是两个半片盒子之间的水痕。
2.从杂交盒中取出载玻片，浸没于大量的0.5×SSC(含0.01 % SDS)溶液中，直到盖玻片分离。
3. 盖玻片除去后，将载玻片放到玻片夹持器上，然后浸入装有约250mL 0.5×SSC(含0.01 % SDS)溶液的避光容器中。将容器放在轨道振荡器上，并将载玻片振荡2分钟。
4. 将载玻片和夹持器一起浸入到另一个装有约250mL 0.5×SSC溶液的容器中，再次将载玻片振荡3分钟。
5. 将载玻片和夹持器一起浸入到另一个装有约250mL 0.1×SSC溶液的容器中，再次将载玻片振荡3分钟。
6. 重复上一步2次，每次清洗1分钟。
7.快速(<10秒)将载玻片和夹持器一起浸入到另一个装有约250mL 0.01×SSC溶液的容器中，立即将载玻片放到铺有3M Whatman滤纸的离心机微量滴定板夹持器中。低速离心约5分钟迅速干燥玻片。
8. 将载玻片放置在避光的盒子内直到准备扫描。(尽量在当日内进行扫描，因为随着时间的延长信号会降低)

疑难解答：
问题一：高背景(荧光或黑洞)
解决方案：对标记探针进行足够的纯化；清洗过程中操作要迅速，避免载玻片干燥；杂交溶液需要与载玻片基底相匹配。
问题二：没有杂交信号或杂交信号非常弱
解决方案：杂交过程中应该连续振荡，不应该有气泡，避免玻片变干；检查RNA的纯化和标记；更换杂交试剂。

除超级杂交液(芯片)厂家外，我公司正在打折促销以下产品：
YT144 Caspase 9 活性检测试剂盒 Caspase 9 Activity Assay Kit
BTN61203 PCR级高GC的DNA清除剂 High GC DNA Scavenger
SV1611 pCLIPf 载体
SV0411 HinfI限制性内切酶 HinfI Restriction Endonuclease
WE0135 SuperSYBR Mixture(高含量ROX校正染料) SuperSYBR Mixture(High ROX)
BTN81220 昆虫RNA柱式提取试剂盒 Insect RNA column Extraction Kit
SY0107 PU.1-Luc荧光素酶报告基因质粒 PU.1 luciferase reporter plasmid 
BTN160681 乙酰胆碱酯酶染色试剂盒(亚铁*化铜法) Acetyl cholinesterase Staining Solution Kit
KFS082 1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 1×SDS-PAGE loading buffer
SY0310 磷酸酶抑制剂混合物(100×，储存液) Phosphatase Inhibitor Cocktail (100×, Stock Solution)
YT398 cDNA第二链合成试剂盒 Second Strand cDNA Synthesis Kit
BTN131043 CHAPS 3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate
HR0099 昆虫膜蛋白提取试剂盒 Insect membrane protein extraction kit
YT899 胰酶细胞消化液 Trypsin-EDTA Solution
YT044 组织线粒体纯化试剂盒 Tissue Mitochondria Isolation Kit
BTN120654A Southern专用DNA Marker(生物素标记) Southern DNA Marker(Labeled by Biotin)
SV1453 Protein G 磁珠
SV0132 BglII限制性内切酶 BglII Restriction Endonuclease
KFS326 APC-Brdu细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法) BrdU cell proliferation Detection Kit
SY0571 线粒体红色荧光探针(CM-H2XRos) Mitochondrial Red CM-H2XRos
SV0694 SfiI限制性内切酶 SfiI Restriction Endonuclease
BTN131230 DNase I干粉 DNase I Powder
超级杂交液(芯片)厂家关键词：超级杂交液,芯片,BTN130905,Super hybrid solution(chip),超级杂交液(芯片)

YT290 活性氧检测试剂盒(荧光探针法) Reactive Oxygen Species Assay Kit
BTN131126 一站式平末端克隆试剂盒 One-Stop Blunt-ended Cloning Kit
ALH253 长片段Taq PCR MasterMix 2×Long Taq PCR MasterMix
YT551 L-亮*酸脱*酶 L-leucine Dehydrogenase (Crude Enzyme)
WE0279 Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 Tricine-SDS-PAGE Gel Kit
BTN101112 柱式水样DNA提取试剂盒 Liquid sample DNA column extraction kit
SV1281 Quick-Load 50 bp DNA Ladder
YT139 Caspase 2 活性检测试剂盒 Caspase 2 Activity Assay Kit
KFS223 Caspase-2蛋白检测试剂盒 Caspase-2 Detection Assay(Western Blot)
SY0463 多聚D-赖*酸(分子量15万～30万) Poly-D-lysine, Mw 150,000-300,000
SV0392 HgaI限制性内切酶 HgaI Restriction Endonuclease
BTN140621 基因转染增强剂 Hexadimethrine bromide
HR0375 1.5M Tris (pH8.8) Tris 1.5M (pH8.8)
SY0102 Myc-Luc荧光素酶报告基因质粒 Myc luciferase reporter plasmid
BTN131281 乙醇-甲醛固定液 A-F Fixative Solution
BTN131179 核酸稀释液，测OD专用 Diluent for NA OD Detection
超级杂交液(芯片)厂家关键词：超级杂交液,芯片,BTN130905,Super hybrid solution(chip),超级杂交液(芯片)


·pUCm-T载体
编号：BTN160101
英文名称：pUCm-T vector
规格：1μg
本产品是一种高效克隆PCR产物(TA Cloning)的专用载体。本载体由pUC系列载体改造而成，在pUC载体的多克隆位点处插入特殊的限制性内切酶识别位点，酶切后能在载体的3´端形成悬挂的“T”末端。很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA 每条链的3´端加上一个突出的碱基A。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT 配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到，pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片断的重组克隆，大大提高了3´末端A 突出PCR产物的连接、克隆效率。本产品应用于进行TA 克隆，克隆PCR产物。对克隆后的PCR产物可以用M13通用引物进行DNA 测序。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一. 实验准备
1. PCR产物3´末端带有突出的A碱基：Taq、Tth、Ampli Taq、Klen Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物3´末端均带有突出的A碱基。建议扩增的PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行回收，再进行连接转化实验。
2. PCR产物3´末端没有突出的A碱基：Pfu、Pwo、Tli或DeepVent等DNA聚合酶具有3´5´外切酶活性，其扩增的PCR产物末端可能不带有3´A，要对这种平末端PCR产物进行克隆，应先对其进行3´末端加A，再进行连接转化实验。

二.连接反应
3.在一个标准的10mL连接反应体系中，加入下列成分：

 

反应组分	10μl反应体系
插入的目的片段	xμL(0.2 pmol)
本产品	1μL(50 ng)
10×连接酶缓冲液	1μL
T4 DNA连接酶	3-5 U
补水到	10 L

 注意:一般最后加入T4 DNA连接酶。
4. 用移液器吹打反应混合液使之混匀后，16-23℃连接1～12小时(或按T4 DNA连接酶供货商提供的操作手册进行连接)。

三．细菌转化和鉴定
5. 将100μl感受态细胞置于冰上解冻后，完全解冻后轻轻将细胞均匀悬浮。
6. 加入上述5μl连接液，轻轻混匀，冰上放置30分钟。
7. 42℃水浴热激90秒，再冰上放置15～20分钟。
8. 加入400μl自备的SOC培养基，37℃ 200～250rpm振荡培养1小时。
9. 4000rpm离心5分钟，用枪头吸掉400μl上清液，用剩余的培养基将细胞悬浮。
10. 将细菌悬液均匀涂布在含20μl的IPTG(100mM)和100μl的X-gal(20mg/mL)的*苄青霉素抗性的自备的LB平板上。(涂布菌液的用量可以根据连接的效率及感受态细胞的转化效率而进行适当的调整。)
11. 将平板于37℃培养1小时，然后倒置培养过夜。(先将平板正向放置1小时，以吸收过多的液体。)

四．筛选
12.转化子的蓝白筛选：
 当外源DNA片段插入到pUCm-T载体中后，由于外源DNA的核酸序列存在改变了LacZ基因的编码，从而影响了其产物β-半乳糖苷酶α-片段的活性，因此重组克隆在-gal/IPTG 平板上呈现为白色，而非重组克隆呈蓝色。选择在IPTG/X-gal 平板上生长的白色菌落，用牙签挑至含*苄青霉素的液体培养基，37℃培养过夜。
13.转化子的鉴定：
1)用上述培养的白色菌落的菌液抽提质粒，用PstI单酶切或用其它合适的酶切,琼脂糖凝胶电泳检查片段大小，确定是否含有目的片段。
2)用M13通用引物或其它合适的引物直接进行测序来确定是否含有目的克隆。

操作提示：
1. PCR产物的纯度：
 连接反应前需用琼脂糖凝胶电泳检测PCR反应产物，如果电泳检测PCR产物条带弥散，或出现非特异条带，则需要切下目的条带，用胶回收试剂盒对目的片段进行回收。若PCR产物电泳检测只有预期大小的明显条带，也应使用PCR产物纯化试剂盒直接纯化PCR产物，以除去引物二聚体。不经纯化的PCR产物在某些条件下可直接用于连接，但由于引物二聚体和PCR产物中其它物质的影响，造成含有插入片段的阳性克隆数减少，因而需要筛选很多克隆方可得到含有目的PCR产物的阳性克隆。
2. 平端PCR产物
 具有校正活性的热稳定性DNA聚合酶如Pfu、Pwo、Tli在进行PCR扩增时产生平端PCR产物。这种平端PCR产物可以进行3´末端加A 尾后连接到pUCm-T载体中，采用这种方法进行连接，可大大提高克隆的效率。
3.优化插入片段和载体的摩尔比
1)pUCm-T载体优化的插入DNA片段和载体的摩尔比为3:1，采用3-10:1的连接比例也可成功进行连接。如果你的PCR产物开始连接的不理想，则有必要优化连接比例。
2)PCR产物的量可采用以下公式进行换算：
PCR片段的量(ng)= [加入载体的量(ng)×插入片段大小(kb)/载体大小(kb)]×插入片段和载体的摩尔比
4.筛选含插入片段的转化子
插入片段成功克隆到pUCm-T载体中，可阻断β-半乳糖苷酶的编码序列，因而重组克隆可在指示培养基上通过颜色进行筛选。大多数情况下含有PCR产物的克隆菌为白色，如果PCR片段和LacZ基因在同一读码框内，即PCR片段碱基数是3的整数倍(含3´-A)，并且读码框无终止密码子，则重组克隆菌可能为蓝色。

质粒图谱：

我公司正在优惠促销探针标记及检测等系列产品，期待您的咨询选购超级杂交液(芯片)厂家。