北京DNA探针变性液优惠促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京DNA探针变性液优惠促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京DNA探针变性液优惠促销
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：10mL
英文名：DNA Probe Denaturation Solution
杂交反应进行时，探针和靶核酸都必须是单链的。如果用双链DNA探针进行杂交(包括检测RNA时)，双链DNA探针在杂交前必须进行变性。本产品就是即用型的DNA探针变性液，专门针对DNA探针在杂交前进行变性处理。

产品特点：
1. 即开即用。
2. 使用方便快捷，可用于核酸杂交。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

一、根据探针和靶分子的不同，分别按下面不同情况计算杂交分子的Tm 值
1. 对 DNA-DNA杂交，其Tm = 81.5 + 16.6×log10[Na+] + 0.41×GC%–500/L
说明：L是探针或靶分子的长度(用两者中最短的一个)
 GC%是探针或靶分子中的GC 百分比(用两者中最短的一个)
 Na+浓度是超级杂交液中Na+的浓度，为0.75 M，16.6×log10[Na+]=(-2.07)
2. 对 DNA-RNA杂交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高10-15℃。
3. 对 RNA-RNA杂交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高20-25℃。
4. 对 Oligo探针杂交，Tm=GC 数量×4℃+AT 数量×2℃。

二、确定最佳杂交温度(预杂交温度跟杂交温度应该一样)
1. 对于大于200bp的DNA-DNA杂交，最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃，一般选择68℃。
2. 对 RNA-RNA或DNA-RNA杂交，最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃。
 如果这样计算出的杂交温度很高(如高于70℃)，则RNA 容易降解，所以最好选用含甲酰胺的超级杂交液(超级杂交液B型)，以便能在42℃完成杂交。
3. 对 Oligo探针的杂交，最佳杂交温度一般比Tm低5℃。由于Oligo 较短，更容易受各种因素影响(如错配率、修饰碱基比例等)，所以最佳温度需要适度摸索和优化。

三、确定洗膜温度
一般使用0.1×SSC做洗膜液，在此条件下的最佳洗膜温度比Tm低5-12℃，一般情况下可以在55℃进行洗膜。Oligo探针可以室温洗膜。

四、预杂交步骤
 预杂交就是用不含探针的超级杂交液跟印迹膜进行孵育，其目的是用所含的非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物将印迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭，否则这些位点会吸附标记的探针，造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的6×SSC溶液中，使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋最好预先封口，再剪掉一角，留一个小口)，按每平方厘米印迹膜加0.2mL超级杂交液的比例沿小口加入超级杂交液，然后用塑料封口机将口封牢。
3. 将此塑料袋浸没入温度设定在最佳杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中，保温1-2小时，延长到12-16小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停的摇动状态中，使超级杂交液与印迹膜充分接触。

五、杂交步骤
1. 如果标记的探针是双链核酸，则需经变性处理。具体操作是：根据探针浓度和杂交所需探针的量计算出所需的探针体积，取出所需体积的探针到一干净的硅化的塑料离心管中，加入等体积的本产品，吹打混匀后室温放置5分钟变性后，将探针样品放入冰浴中冷却，加入0.05倍体积的自备的1 M的Tris-Cl溶液(pH7.2)以及等体积的自备的0.4 M的HCl溶液。
将探针样品保存在冰浴中直至需要。如果是单链DNA或RNA探针，则不需变性，直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪刀剪一小口，加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率而定，一般要求终浓度不能低于1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷贝基因，探针的加入量应加大，而对于检测克隆的基因片段，则探针的量可减少。如果是放射性探针，应将此塑料袋套在另一塑料袋之中，以避免杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3.在选定的杂交温度下继续保温，时间一般为6-12小时。

六、洗膜步骤。
 注意在下面的所有操作过程中，一定不要使印迹膜干燥。此步是将与印迹膜非特异结合的探针分子洗去而只留下特异结合的探针分子。由于非特异性杂交的杂交分子解链温度较低，热稳定性较差，在一定的温度和较低的离子强度下，即可洗掉。
1.杂交完毕，取出塑料袋，剪去一角，倒出所有的含探针的杂交液。此含探针的杂交液可以多次使用再倒弃。
2. 剪开杂交袋，用镊子取出印迹膜，浸没于大量的2×SSC(含0.5 % SDS)溶液中，室温下振荡漂洗15分钟。
3. 重复上步操作一次。
4. 将印迹膜转移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中，在计算好的洗膜温度下振荡漂洗30分钟至1小时。
5. 重复上步操作一次。如果是同位素标记探针，则需要重复至用盖革计数器在无核酸区域检测不出放射信号为止。
6. 将印迹膜转移到滤纸上，吸去表面液体后印迹膜即可用于后续检测。

更多有关北京DNA探针变性液优惠促销的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·Denhardt溶液(非同位素探针)
编号：BTN91104B
英文名称：Denhardt Solution
规格：250mL
本产品是最经典的、用于核酸膜杂交时降低膜对标记探针的非特异结合的试剂，早在Southern杂交出现前10年由Denhardt发明，该产品可用与Southern(含单拷贝基因)、Northern、非同位素杂交(B型规格)，与硝酸纤维素膜、尼龙膜等各种常用的核酸杂交介质兼容。A和B分别适用于同位素和非同位素探针。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

·谷胱甘肽琼脂糖(GST-琼脂糖)
编号：BTN120101
英文名称：Glutathione Agarose
规格：2mL
谷胱甘肽琼脂糖亲和基质是结合谷胱甘肽(GSH)的4％浓度的交联珠状琼脂糖基质，可用于结合和分离纯化带有谷胱甘肽硫转移酶(GST)等谷胱甘肽亲和性蛋白质分子，特别是重组表达的GST融合蛋白。可用于带有GST标签的重组蛋白的纯化和GST pull-down实验。

产品特点：
1．特异性高，不与非GST融合蛋白相结合。
2．高结合量，每毫升基质可结合5～10mg重组GST融合蛋白。
3．高度灵活，可填装任意品牌的柱子。

储存条件：低温运输，4℃保存(切勿冻结)，有效期一年。

·柱式土壤RNA提取试剂盒
编号：BTN90705
英文名称：Soil microbe RNA Column extraction kit
规格：50次
谷胱甘肽琼脂糖亲和基质是结合谷胱甘肽(GSH)的4％浓度的交联珠状琼脂糖基质，可用于结合和分离纯化带有谷胱甘肽硫转移酶(GST)等谷胱甘肽亲和性蛋白质分子，特别是重组表达的GST融合蛋白。可用于带有GST标签的重组蛋白的纯化和GST pull-down实验。

产品特点：
1．特异性高，不与非GST融合蛋白相结合。
2．高结合量，每毫升基质可结合5～10mg重组GST融合蛋白。
3．高度灵活，可填装任意品牌的柱子。

储存条件：低温运输，4℃保存(切勿冻结)，有效期一年。

·农杆菌GV3101化学感受态细胞
编号：BTN140384
英文名称：E.coli GV3101 Chemical Competent Cell
规格：10×100μL
 本产品为GV3101农杆菌化学感受态细胞，其具有利福平和庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达104cfu/μg。

基因型：C58(rifR)Ti pMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在 28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。
2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL感受态细胞加1μg质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置10分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻 5分钟(注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基，28-30℃振荡培养2~3小时。使菌体复苏，表达抗性。
6. 5000rpm离心1分钟收菌，保留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72小时。
 注：当平板只含有50μg/mL kan时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入50μg/mL kan，20μg/mL rif时，需 28℃培养 60h；如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要 28℃培养 72-90小时。

注意事项：
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 利福平浓度不应高于25μg/μL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有 50μg/mL kan，若所用平板含有 20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止 Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
6.相关抗生素配方：

 

抗生素	配方	原液	工作液
羧苄青霉素(carb)	双蒸水溶解	50mg/mL	50μg/mL
硫*(代"酸")卡那霉素(kan)	双蒸水溶解	50mg/mL	50μg/mL
链霉素(strep)	双蒸水溶解	10mg/mL	50μg/mL
利福平(rif)	DMSO溶解	10mg/mL	20μg/mL
庆大霉素(gent)	双蒸水溶解	20mg/mL	40μg/mL

北京DNA探针变性液优惠促销关键词：DNA Probe Denaturation Solution,DNA探针变性液,BTN131208

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腺苷脱*酶 Spectinomycin HCl 9026-93-1
Molisch试剂   100ml
M0103 TMB单组份显色液                                  
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ARB11017 人层连蛋白/板层素(LN)elisa检测说明书 Human laminin,ln ELISA KIT
β-半乳糖苷酶(GAL)检测试剂盒(PNP比色法)   50T
BL1426 5×TBE 缓冲液
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ARB11402 人神经*酸酶(NA)含量测试 Human neuraminidase,na ELISA KIT
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9000-90-2 α-淀粉酶(高温淀粉酶)
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BL1222 0.4% TTC染色液
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PY02-018  克氏双糖铁琼脂  250克  

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