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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
525
- 英文名:
Agarose gel DNA column Recovery Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(柱式吸附)厂家价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(柱式吸附)厂家价格
编号:BTN60202
规格:50次
英文名:Agarose gel DNA column Recovery Kit
品牌:百奥莱博
产地:北京
本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中(如PCR反应)回收DNA片段。试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅胶膜和独特的溶胶体系,或DNA反应体系中回收的DNA片段,回收效率可达50-90%(跟片段大小相关)。
产品特点:
1.高效,回收效率最高可达90%(跟片段大小和胶浓度等因素有关)。
2.快速,整个过程只需要十余分钟。
3. 回收DNA的范围为50bp-40Kb(但效率各不相同)。
4. 纯度高,本试剂盒回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR登等多种分子生物学实验。
5. 用途广,本试剂盒能回收单链、双链及环状DNA。
6. 储存方便,试剂盒可以在室温放置数月,不影响其质量。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 通用溶胶液 | 25ml |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存,有效期为一年。
使用方法:
1. 对胶回收:切取含DNA片段的琼脂糖凝胶(100mg左右,尽可能多地把多余的胶切除,否则会影响回收效率),放入一干净的1.5mL塑料离心管(自备)中,用移液枪头捣碎,按重量比为1:3到1:5的比例加入通用溶胶液(100mg琼脂糖凝胶需要加入300μL-500μL通用溶胶液)。
PCR回收:直接在PCR反应管中加3-5倍体积的通用溶胶液,混匀,然后跳过第2步、直接从第3步做起。如果PCR反应中使用了石蜡,需要预先去除。
2. 50℃保温使胶完全溶化(一般需要5分钟),其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。如果片段长度在300bp以下,建议不要加热,以免DNA变性,影响回收率。
3. 将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中,套上液体收集管,静置3分钟。
注意:静置有助于DNA与离心吸附柱的硅胶膜结合。若一次加不完,可分两次加入并离心。
4. 12000~15000g离心1分钟,倒掉收集管中的液体。
5. 加入0.7-0.8mL通用洗柱液于离心柱中,室温静置2分钟。
6. 12000~15000g离心1分钟,倒弃收集管中的废液。
7. 12000~15000g离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
8. 将离心柱置于一新的干净的塑料离心管(自备)中,加入30-100μl DNA洗脱液2.0于离心吸附柱硅胶膜的中央,静置3分钟。
9. 12000~15000g离心1分钟。
10.离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液,可立即用于后续实验或者放-20℃长期保存。
注意事项:
1.电泳回收DNA时,电泳缓冲液可以为TAE、TBE或者DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2。回收效果为SuperBuffer-2最好,TAE次之,TBE最差。详细见SuperBuffer-2产品介绍。
2. 通用洗柱液含有容易挥发物质,使用后一定要拧紧瓶盖,密闭保存。
3. 琼脂糖凝胶体积的大小与回收率成反比关系,即体积越大,越不利于回收,一次胶回收以使用100mg琼脂糖凝胶为宜。
4. 如果在五分钟内凝胶溶化不完全,可以适当的延长水浴时间以使胶充分溶化,否则DNA包裹在琼脂糖凝胶中,影响DNA的回收效率。
5.胶溶化后的液体转移到离心柱后,可以延长静置时间使DNA与膜充分结合,提高回收效率。
6. 洗脱DNA前的空甩很重要,其目的是去除膜上残留酒精,否则残留酒精会影响后续DNA反应。
7. 增大DNA洗脱液2.0使用量有利于回收,但要注意实际上样量与最终回收体积的关系,以便于计算回收率。DNA洗脱液2.0可以用TE或水替代,但回收率稍有降低。
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琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(柱式吸附)厂家价格关键词:Agarose gel DNA column Recovery Kit,BTN60202,琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,柱式吸附,琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(柱式吸附)
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编号:BTN131198
英文名称:One-step plasmid DNA extraction kit with 96-wells plate
规格:1次
·5´RACE试剂盒
编号:BTN101105
英文名称:5´-RACE Kit
规格:10次
研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点,目前最通用的方法是5´-RACE法,RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术,它在不建立cDNA文库的前提下,利用已知cDNA序列设计引物,通过往两端延伸和扩增获得其5´-端序列。本试剂盒就是根据5´-RACE原理而开发。RACE的原理如下图:
产品特点:
1. 即开即用,客户不需要单独准备各种材料。
2.反应条件经过精心优化,包括使用无RNase H活性的MMLV和优化的引物。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| MMLV逆转录酶-RI混合液(RNase H-,200U/μL) | 10μl |
| MMLV Buffer-dNTP混合液 | 60μl |
| 微量核酸沉淀剂 | 400μl |
| TdT(末端转移酶) | 10μl |
| 2×TdT Buffer(含dATP) | 100μl |
| PCR MagicMix 3.0 | 1.5ml |
| 5´-RACE引物A-引物B混合液 | 100μl |
| 5´-RACE引物C | 100μl |
| RNase-Free水 | 1ml |
储存条件:低温运输、-20℃保存、有效期一年。
使用方法:
1.变性模板RNA:将1μg mRNA或5μg总RNA加入到一个RNase-free的PCR管中,补RNase-Free水到9μL,65℃保温5分钟后短暂离心,立即放冰上待用。如果RNA浓度偏低,体积超过9μl,可以使用本公司的核酸浓缩剂(需另购,产品编号为BTN110801)浓缩到所需的体积。
2. 设置RT反应(用户可以根据需要设阴性对照):在上步的含变性后的RNA模板的PCR管中,按顺序加入:
| 成分 | 用量 |
| 自备的基因专一性引物A(10μM) | 4μl |
| MMLV Buffer-dNTP混合液 | 6μl |
| MMLV逆转录酶-RI混合液 | 1μl |
| 合计 | 20μl |
3. 37℃保温60分钟,42℃保温30分钟,50℃保温10分钟,最后75℃保温10分钟使逆转录酶变性。
4. 短暂离心5秒后待用。
5.在PCR管中加入40μl微量核酸沉淀剂(本产品含不溶的核酸助沉剂,用前需要充分摇匀再取用),震荡混匀。
6.室温12000rpm离心15分钟,小心吸弃上清。
7. 加入1mL自备75%乙醇,室温12000rpm离心5分钟,小心吸弃上清。
8. 短暂离心数秒,小心吸弃残留液体后,稍微晾干后加入10μL RNase-free水,充分吹打溶解,得到cDNA溶液。注意:为保证加尾效率,溶解cDNA的RNase-free水最好不要超过10μl。
9. 加尾反应:在10μL cDNA溶液中加10μL 2×TdT Buffer(含dATP)和1μL TdT酶,轻柔吹打混匀。
10. 37℃保温15分钟进行加尾反应,然后75℃保温3分钟灭活末端转移酶。
11. 加入0.5mL RNase-free水稀释加尾反应体系。此稀释液将作为PCR的模板。
12. 第一轮PCR:用不同量的稀释后的加尾反应液设置PCR反应(样品组最好设用量梯度,单位:μL)。
| 成分 | 梯度1 | 梯度2 | 梯度3 | 梯度4 |
| PCR MagicMix 3.0 | 25 | 25 | 25 | 25 |
| 自备基因专一性引物B(10μM) | 2.5 | 2.5 | 2.5 | 2.5 |
| 5´RACE引物 A-引物B混合液 | 2.5 | 2.5 | 2.5 | 2.5 |
| 稀释后的加尾反应液 | 1 | 5 | 10 | 15 |
| RNase-free 水 | 19 | 15 | 10 | 5 |
| 合计 | 50 | 50 | 50 | 50 |
13. 按下列条件进行 PCR(注:应根据实际情况选择适当的退火温度)。
第1次循环:94℃ 5分,48-52℃ 2分,72℃ 4分
第2-30次循环:94℃ 40秒,52-60℃ 1分,72℃ 3分
最后延伸:72℃ 15分
14. 取10-20μL PCR产物进行琼脂糖电泳电泳检查PCR结果,如果一条清晰的条带,则可以不做后续的第二轮PCR,而直接进行 DNA 测序或TA克隆。
15. 第二轮PCR:如果第一轮PCR没有一条清晰的条,则带从4管PCR产物中各取1μL分别加入到20μL RNase-free水中进行稀释,然后各取1μL分别作为4管第二轮PCR的模板:
| 成分 | 用量 |
| 第一轮 PCR产物的稀释液 | 1μl |
| PCR MagicMix 3.0 | 25μl |
| 5´RACE引物 C | 2.5μl |
| 自备基因专一性引物 C(10μm) | 2.5μl |
| RNase-free 水 | 补水至50μl |
| 合计 | 50μl |
16. 按下列条件进行 PCR:第 1-30次循环(94℃ 40秒,52-60℃ 1 分,72℃ 3分),最后延伸:72℃ 15分
17. 取10-20μL第二轮 PCR产物进行琼脂糖电泳,一般都会有一个样品有清晰的条带出现,则可以直接进行DNA测序或TA克隆。
琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(柱式吸附)厂家价格关键词:Agarose gel DNA column Recovery Kit,BTN60202,琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,柱式吸附,琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(柱式吸附)
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文献和实验的DNA,满足一次大量片断回收的需求。另外,试剂盒推荐的洗脱体积是50ul,但是如果需要浓度高的回收产物,也可以用不少于15ul的纯水洗脱,而且回收率也不会有太大的影响。回收产物可用于测序、克隆、标记、酶切、体外转录和芯片分析等后继实验。操作也同样非常简单,无非是溶胶吸附、洗涤柱子,最后洗脱。这样,一个试剂盒兼具了多种优点,加上价格相宜,实在是进口产品中的性价比之王。特别是大到9kb的片断,回收率可以达到95%是难得的。这个试剂盒使用中值得注意的几个小技巧,比如如果凝胶体积大于350mg,可以分次离心
国产产品的对比,当然,参数是厂家提供的,标准有差别的。 品牌 天根(天为时代) 杭州 维特洁(已被Axygen收购)深圳天地人Omega产品普通琼脂糖凝胶回收试剂盒AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒小量胶回收试剂盒琼脂糖凝胶回收试剂盒回收片段大小100bp-10kb75bp-10kb50bp-20kb回收率>80%(100 bp的DNA片段回收率为50 %以上)60�85%(根据长度不同)85%产品描述可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲
Qiagen公司的琼脂糖凝胶回收试剂盒:MinElute Gel Extraction Kit 品牌:Qiagen回收范围:70bp-4kb价格:(50包装1,485,约29元/反应)特点:洗涤体积只要10μl,回收产物浓度高,方便后继实验使用方便快捷(wash-and-spin)高回收率回收产物纯度高,可用于同位素或荧光测序、芯片分析、连接转化、酶切、标记、PCR、显微注射、体外转录等后继实验使用心得:如果要回收片断量本来就很少,比如只有几十个ng,用常规的试剂盒洗脱得到将近50ul的产物
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