柱式酵母质粒DNA提取试剂盒 DNA纯化

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百奥莱博专业生产销*(代"售")柱式酵母质粒DNA提取试剂盒 DNA纯化，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：柱式酵母质粒DNA提取试剂盒 DNA纯化
编号：BTN70202
规格：50次
英文名：Yeast plasmid DNA column extraction kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
本试剂盒是专门用于提取酵母质粒DNA的产品(不适用于酵母dsRNA质粒)。本产品根据酵母细胞壁十分坚硬的特点，在细菌质粒碱裂解法的基础上，增加了高效裂解酵母细胞壁的预处理步骤，可在1小时左右得到可以用于PCR或转化酵母质粒DNA。

试剂盒特点：
1.快速，整个过程只需要一个小时左右，可同时处理多个样品。
2. 得到的酵母质粒DNA 纯度高，可直接用于转化和PCR等实验。
3.可以从平板上的菌斑或液体培养的酵母中抽提质粒DNA。
4. 安全，不需使用玻璃珠、酚、*仿等试剂。
5. 每5-10mL 酵母培养液一般可以提取到1μg左右的高拷贝酵母质粒DNA。
6. 即开即用，经济实惠，客户自己不需要准备额外的试剂。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	30ml
溶液B	13ml
溶液C	13ml
溶液D	18ml
破壁酶	50mg
RNase A溶液10mg/mL)	0.15ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(RNase A溶液4℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 将5-10mL 酵母过夜液体培养物分多次转移到1.5mL塑料离心管中。每转移一次后，需要12000～15000×g室温离心1分钟，然后吸弃液体培养基。注意：不要使用培养时间超过16小时的酵母液体培养物，否则质粒DNA产量偏低；也不要使用超过10mL的酵母液体培养物，否则破壁不充分，降低质粒DNA产量。
2. 加入1mL自备的无菌水，充分震荡混匀，12000～15000×g室温离心1分钟，吸弃上清。
3. 加入600μl溶液A，充分震荡细胞沉淀重悬，95℃保温10分钟。
4. 12000～15000×g室温离心1分钟，弃上清液。
5. 加入250μl含破壁酶的溶液B(配制方法是将本试剂盒提供的50mg 粉末状的破壁酶和0.15mL RNase A溶液全部加入到装有13mL溶液B的塑料瓶中，轻柔摇晃混匀后使用。未用完的部分需要分装成小份然后放-20℃保存，否则破壁酶很容易失去活性)，吹打混匀。
6. 37℃保温30分钟，延长保温时间到60分钟有利于细胞壁的裂解。注意：放置较长时间后，溶液B中的裂壁酶会逐渐失活，额外再加入一些裂壁酶(如蜗牛酶、Lyticase、Zymolyase、Lywallzyme等，总浓度为1mg/mL)可以极大提高产量。
7. 将离心管放冰浴冷却后，加入250μl溶液C，轻轻颠倒混匀直至裂解液变得澄清，然后室温放置5-10分钟。注意：不要剧烈震荡，否则基因组DNA 将断裂并污染质粒DNA。
8. 加入350μl溶液D，轻轻颠倒混匀几次，管内将出现白色沉淀物，然后冰浴放置10-30分钟(如果质粒较长，最好放置30分钟)。
9. 12000～15000×g室温离心6-10分钟，将上清液转移到离心吸附柱中。
 注意：不要将漂浮在液面的沉淀物(如果有的话)转移到离心吸附柱中。上清液可以分多次转移。
10.室温下放置至少2分钟以让质粒DNA 充分结合到离心吸附柱上。
11.12000～15000×g室温离心1分钟，弃穿透液。
12. 将500μl 通用洗柱液加入离心吸附柱中，12000～15000×g室温离心1分钟，弃穿透液。
13. 重复上步操作一次。
14.12000～15000×g室温离心1分钟去除离心吸附柱中残留液体。不要此步省略，否则残留洗液将影响后续的电泳、PCR和转化实验。
15. 将离心吸附柱套在一干净的1.5mL塑料离心管中，加入30-100μl DNA 洗脱液2.0(加入的量取决于预期的DNA浓度)至离心吸附柱的膜的中央。
16.室温下放置至少2分钟。
17.12000～15000×g室温离心1分钟以洗脱DNA。
18. 如有必要，可以再加入适量DNA 洗脱液2.0洗出残留的DNA。第二次洗脱得到的DNA的产量约为第一次的30-50%。不要将已经洗脱的、含DNA的溶液再加上去。

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·即用型蓝白T载体B型(T7-T3，有MCS)
编号：BTN120512
英文名称：Instant Blue-White Vector T，Type B
规格：20次
本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段，其两个末端的5´都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：
1. 由于是通过酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3. 插入位点两侧有对称的Eco RI酶切位点，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
4. 来源于pBlueScript ⅡSK(+)，故克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α 肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

质粒图谱

多克隆位点



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·人基因组DNA(女性)
编号：BTN131032
英文名称：Human Genomic DNA(Female)
规格：100μg
本产品为人基因组DNA，来源于多位匿名的捐献者，其中BTN131031为男性基因组DNA；BTN131032为女性基因组DNA。利用脉冲电场凝胶电泳测量，90%以上的DNA的大小大于50kb。该DNA适用于Southern blot杂交,基因组分析(包括PCR)及基因组文库构建等实验。。

储存条件：低温运输、4℃保存、有效期一年。

·MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
编号：BTN140634
英文名称：MTS Cell Proliferation And Cytotoxicity Detection Kit
规格：500次
MTS是一种新型甲臜化合物，和MTT同属四唑氮衍生物。MTS能被活细胞里的线粒体脱*酶降解而产生棕黄色水溶性的甲臜，通过测定甲臜的光谱吸收，进而可以测定细胞的增殖情况。原理如下：


产品特点：
1．本试剂盒是单溶液式细胞增殖与细胞毒性检测试剂，主要成分包含MTS和一个电子耦合试剂，溶液的稳定性强，反应的灵敏度高。
2．操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时，无需洗涤或收获细胞，免去溶解步骤。
3．无放射性。不需要配制液闪混合物，也不需要处理废弃物。
4．与MTT相比，使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。
5．操作灵活，与MTT不同，平板读数后可放回温箱继续孵育，使颜色进一步生成。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期半年。

使用效果：
96孔板中加入细胞100μL/孔(约1×104)，37℃，5% CO2细胞培养箱培养24小时，加入适当浓度的受试化合物。培养箱中孵育适当时间，每孔中加入10μL的MTS细胞增殖及毒性检测溶液。37℃孵育1-4小时。490nm波长检测光密度。

备忘录：
1．细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值(完全培养基加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)或空白药物孔OD值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)，各重复孔的OD值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。
细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
2．求出T/C = 50%时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

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