组织培养专用蛋白酶抑制剂多少钱

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

组织培养专用蛋白酶抑制剂多少钱由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多组织培养专用蛋白酶抑制剂等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：组织培养专用蛋白酶抑制剂多少钱
编号：BTN130531
规格：1mL
英文名：Protease Inhibitor for Tissue Culture
品牌：百奥莱博
产地：北京
本产品就是混合各种蛋白酶抑制剂而得的200×浓缩液，溶剂为DMSO。组织培养时，各种分泌蛋白会不同程度的被各种外源和内源性蛋白酶降解。为防止分泌蛋白的降解，需要在培养基中添加各种蛋白酶抑制剂。

产品特点：
1. 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
2. 抑制谱广，由多种蛋白酶抑制剂组成，能特异性抑制丝*酸蛋白酶、半胱*酸蛋白酶、天门冬*酸蛋白酶及*基肽酶等各种蛋白酶活性。
3. 它可以与各种组织培养基兼容，在培养基中加入1/200体积即可。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期两年。

欲咨询购买组织培养专用蛋白酶抑制剂多少钱，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)
编号：BTN80803
英文名称：Animal mitochondrial DNA column extraction kit(PCR Grade)
规格：50次
线粒体DNA(mtDNA)是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料，但传统的两步式mtDNA提取方法是先温和裂解细胞，分离线粒体，然后再从线粒体中提取mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制，需要针对不同组织材料单独进行优化。本试剂盒克服了上述缺点。

产品特点：
1. 不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。
2. 得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3. 每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。
4. 注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大，非常难提。

产品组成：

 

成分	规格
溶液A	13ml
溶液B	13ml
溶液C	18ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，短期可以在室温放置；长期保存最好放4℃。

使用方法：

一：培养细胞预处理
1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞，离心收集后弃上清。
2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次，离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二：组织细胞预处理
3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小最好)，转移到1.5mL塑料离心管中，用于mtDNA提取。注意：最好不要使用冻存的动物组织，因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破，使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解，影响回收率。
三：血液预处理
4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟，取白细胞层。
5. 用自备PBS洗涤白细胞两次，得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。
四：mtDNA提取
5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A，充分吹打分散。如果是剪碎的组织，不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。
7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。
8. 加入350μL冰浴的溶液C，温和混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后放冰上放置20-25分钟。
9.室温12000～15000g离心10分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。
10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合，此步十分重要。
11.室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中的废液。
12. 加入500μL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中废液。
 注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
13. 重复上步1次。
14.室温12000～15000g离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中，加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
16.室温12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强，如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于第一次洗脱的20-30%)，但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。
18. 12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩，可以使用本公司的核酸浓缩剂。
19. 由于DNA机械断裂，电泳时DNA可能不呈现专一的带，但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。


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·Deaza dGTP溶液(5mM)
编号：BTN131139
英文名称：Deaza dGTP Solution
规格：0.4mL
本产品5mM的7-Deaza dGTP，在测序时代替dGTP，可以去除测序时的G带压缩现象，还可以用于在PCR时，降低PCR的复性温度。



储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(百万碱基级)
编号：BTN130949
英文名称：Gram positive bacteria DNA extraction kit(millions of base)
规格：10次
本产品5mM的7-Deaza dGTP，在测序时代替dGTP，可以去除测序时的G带压缩现象，还可以用于在PCR时，降低PCR的复性温度。



储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·酵母化学感受态细胞制备试剂盒(B型)
编号：BTN81109B
英文名称：Yeast Chemical Competent Cell Preparation Kit
规格：20次
本酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，高效快速制备酿酒酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化的产品。

产品特点：
1.一次制备，-80℃保存，多次使用，免去每次转化都要制备酿酒酵母感受态细胞。
2. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要30分钟
3. 主要用于酿酒酵母S. cerevisiae，也适用于其他多种实验用酵母菌株，包括S. pombe、C. albicans、Pichia pastoris等。
4. 受体酵母可以不含质粒，也可用于携带有选择性质粒的酵母。
5. 对酿酒酵母，最高转化效率可达到0.2-1×105个转化子/μg质粒DNA。对其他酵母，效率稍低，范围在100-2000个转化子/μg质粒DNA。
6. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。
7.可以用于酵母双杂交、定点突变(Site－Directed Mutagenesis)、基因破坏(Gene Disruption)、等位突变基因修复(Mutant Allele Recovery)等实验。
8. 本产品可以制备20 只酵母感受态细胞(需要200mL 酵母培养液)，其中A型只用于制备感受态细胞，B型还带高效转化液。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

产品组成：

成分	20T(A)	20T(B)
制备液A	120ml	120ml
制备液B	6ml	6ml
制备液C	10ml	10ml
转化液A	无	30ml
转化液B	无	30ml
说明书	1份	1份

自备试剂：YPD培养基

使用方法：

一：酵母化学感受态细胞的制备
说明：按本方法制备1 管酵母化学感受态细胞就需要OD600达到0.6-1.0的新鲜酵母培养液10mL，用户需根据所需酵母感受态细胞的数量决定培养细胞的体积。如果超过10mL，则制备液的使用量需要按比例增加。
1. 挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到装在50mL离心管中的10mL的自备的YPD培养基中。
2. 30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到0.6-1.0(相当于0.6-1×107细胞/mL)。
3.室温3000rpm离心5 min，弃上清得酵母细胞沉淀。
4. 新鲜制备适量的酵母感受态制备工作液。对10mL 酵母需要5.25mL的工作液，其配制方法是：将4.75mL 制备液A、0.25mL 制备液B和0.25mL 制备液C 加入到一个无菌的离心管中后充分震荡混匀即可。酵母感受态制备工作液可放室温待用。
5. 用0.5倍体积的新鲜配制的酵母感受态制备工作液洗涤酵母细胞沉淀一次(对10mL 酵母则需要5mL 酵母感受态制备工作液)。即混合后振荡1分钟，室温3000rpm离心3分钟，去上清得洗涤后的酵母细胞沉淀。
6. 再用0.02倍体积的酵母感受态制备工作液充分重悬菌体(对10mL酵母，则需要0.2mL 酵母感受态制备工作液)。
7. 按每管0.2mL 分装到冷冻管中，放入保温冰盒中冷却半小时后再放入-80℃冰箱待用。0.2mL的感受态细胞足够1次转化使用。注意：放入保温冰盒的目的是使温度缓慢下降，急冻将使转化效率降低，这点跟大肠杆菌感受态制备过程不同。

二：化学转化酵母感受态细胞(只有B型提供相关试剂)
1. 将总体积不超过20μl的0.1-5μg质粒DNA 加到刚从-80℃冰箱取出的、还处于凝固状态的0.2mL 酵母感受态细胞上。注意：最好同时做一个不加质粒DNA的阴性对照组。
2.室温充分振荡直到凝固的感受态细胞完全融化。注意：此步非常关键，如果能在恒温振荡器上37℃振荡5分钟，则效果更好。
3. 加入1.4mL转化液A，轻柔颠倒混匀一分钟。
4. 30℃培养1小时。
5.室温3000g离心5秒，弃上清。
6.在酵母细胞沉淀中加1.0mL转化液B，振荡一分钟。
7.室温3000g离心5秒，弃上清。
8.在酵母沉淀细胞中加入适量(如100μl)的转化液B，混匀后在在选择培养基上全部涂盘。
9. 30℃培养3-5 天后即得酵母转化菌落。


组织培养专用蛋白酶抑制剂多少钱关键词：Protease Inhibitor for Tissue Culture,BTN130531,组织培养专用蛋白酶抑制剂


·MTT检测试剂盒
编号：BTN111105
英文名称：MTT Assay Kit
规格：500次
MTT广泛用于检测细胞生长，其原理是MTT可以被活细胞线粒体内的脱*酶还原生成深紫色的formazan结晶，而死细胞则无此活性。深紫色的formazan结晶被溶解后可以通过测定490nm波长的光吸收而测定出其浓度，并由此推测出细胞的活力，细胞增殖越旺盛，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。其原理如下：


产品特点：
1．采用独特的Formazan溶解液，可以充分溶解formazan，减少误差。
2．背景低，灵敏度高，线性范围宽，重复性好。
3．本产品为足够500次(5个96孔细胞培养板)微孔板检测。
4．可用于生物活性因子活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性测定等。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	5ml
溶液B	50ml
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存(但溶液B也可以常温运输和保存)，有效期一年。

使用方法：
下面操作是检测细胞毒性的试验，其他应用跟此类似或更简单(如生长曲线试验)，操作步骤可以以此为基础稍作修改即可，故不再赘述。

㈠、接种细胞
1．按常规胰酶消化法消化汇合的单层细胞，收集到含血清的培养基中。
2．200g离心5分钟收集细胞沉淀。
3．用培养基重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬浮液并计数。
4．将细胞稀释到2.5×10³个/mL～5×10⁴个/mL之间(需要根据细胞的生长速度决定)，如果不知道生长数度，一般可以稀释到1×10⁴个/mL。
5．将足够量的细胞悬液转移到培养皿中(便于用排枪取样)。一个96孔板的MTT检测需要约20mL的细胞悬液。
6．用排枪在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL细胞悬液(对正常细胞)。如果是肿瘤细胞，则加入100μL肿瘤细胞悬液和100μL培养基(总体积为200μL)。注意：一定要把细胞加在孔的正中，否则细胞会聚集在孔的角落处，影响试验。
7．用排枪在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟细胞悬液等体积的培养基。第1 列各孔将作为+培养基-细胞+MTT对照(用于测OD时调零)，第12列加培养基的作用是减少边缘效应对第11 列反应的影响。
8．按常规细胞培养方法在37℃和5% CO2条件下孵育1-3天，使细胞进入指数生长期。

㈡、药物处理
9．用培养基将药物稀释到8个待测浓度(如果不知道待测浓度，则需要预试验确定)，一般一种药物需要做3块平行板。
10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培养基(不要触动细胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培养基。
11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鲜培养基，这些孔将作为+培养基+细胞-药物的对照。
12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8个浓度梯度的待测药物，每列加入一个浓度的药物。
13．按常规方法把96孔板继续放在在37℃和5% CO2条件下孵育一定的时间，此段时间即为药物处理细胞的时间，由用户自己决定。
14．处理结束后去除第2 到第11列(共10列，均含细胞)所有孔中的培养基，并再加入100μL新鲜培养基。
15．每天换培养使细胞数量扩增2-3倍(所需时间随细胞不同而不同)。

㈢、存活细胞计数
16．在生长末期，去除第1到第11列各孔中的培养基后，再加入100μL新鲜培养基和10μL溶液A(含MTT成分)，用锡箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2条件下继续培养4-8小时。注意：溶液A在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴至全部溶解，摇匀后使用。MTT有致癌性，一定要带手套操作。
17．小心吸弃孔内培养基(含溶液A)。由于培养基可能会影响光吸收，最好尽可能去除。
18．每孔加入100μL溶液B，置摇床上低速振荡10分钟，使MTT形成的formazan结晶物充分溶解。
19．由于产物不稳定，故需要立即在酶联免疫检测仪上选择490nm测定吸光度。
 注意：用第1 列各孔(+培养基-细胞+MTT对照)调零。
20．计数同样处理的各次重复的平均值。
21．以药物浓度为横轴，以吸光度为纵轴绘制曲线。由于各处理吸光度绝对值差别很大，一般需将其转化成生长抑制率(以不加药物的第2和第11列各孔数据的平均数作为100%)，这样便于计算出IC50，用于各种药物处理效果的比较。注意：如果测生长曲线，则以时间为横轴。正常生长曲线一般呈现S型，具有促进作用的则斜率加大。

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