超级杂交液(含50%甲酰胺)北京厂家

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超级杂交液(含50%甲酰胺)北京厂家由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多超级杂交液(含50%甲酰胺)等探针标记及检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：超级杂交液(含50%甲酰胺)北京厂家
编号：BTN80915B
规格：100mL
英文名：Super hybrid solution(with 50% formamide)
品牌：百奥莱博
产地：北京
核酸杂交一般是指用一种标记的核酸探针与印迹膜上的核酸进行杂交，由此检测印迹膜上是否存在与探针同源的核酸分子(靶分子)。核酸杂交是分子生物学的基本技术之一，应用非常广泛。由于核酸杂交效率受印迹膜种类、杂交温度、探针浓度、杂交液离子强度、杂交液pH及杂交液粘度等因素影响，用户自己摸索和优化相关条件非常繁琐，因此本公司开发了本产品，其操作流程如下：


产品特点：
1. 既可用于Southern杂交(靶分子为DNA)，也可用于和Northern杂交(靶分子为RNA)，还可以用于菌落杂交，基因芯片等杂交。
2. 既可以用于同位素探针的杂交，也可以用于非同位素探针的杂交。
3. 既可以使用DNA(包括DNA Oligo)探针，也可以使用RNA探针(包括RNA Oligo)
4.含多种能够促进杂交的聚合物，使杂交反应能在6～12小时完成，而常规杂交反应一般需要12～24小时。
5.含多种封堵剂，能阻印迹膜对探针分子的非特异性吸附，能有效降低背景信号，延长曝光时间以便检测到低拷贝的RNA(Northern)和单拷贝的基因(Southern)。
6. A型不含甲酰胺，B型含50%的甲酰胺。后者使杂交在较低温度就可以完成，适合Tm 较高的分子杂交(如RNA-RNA和RNA-DNA杂交)。
7.跟各种常用的印迹膜兼容，包括硝酸纤维素膜和尼龙膜。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。本产品属于高盐溶液，低温下产生沉淀，必须在65℃加热溶解并充分摇匀后才能使用。

使用方法：

一、根据探针和靶分子的不同，分别按下面不同情况计算杂交分子的Tm 值
1. 对DNA-DNA杂交，其Tm = 81.5 + 16.6×log10[Na+] + 0.41×GC%–500/L
说明：L是探针或靶分子的长度(用两者中最短的一个)
GC%是探针或靶分子中的GC 百分比(用两者中最短的一个)
Na+浓度是本产品中Na+的浓度，为0.75 M，16.6 ×log10[Na+]=(-2.07)
2. 对DNA-RNA杂交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高10-15℃。
3. 对RNA-RNA杂交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高20-25℃。
4. 对Oligo探针杂交，Tm=GC 数量×4℃+AT 数量×2℃。

二、确定最佳杂交温度(预杂交温度跟杂交温度应该一样)
1. 对于大于200bp的DNA-DNA杂交，最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃，一般选择68℃。
2. 对RNA-RNA或DNA-RNA杂交，最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃。如果这样计算出的杂交温度很高(如高于70℃)，则RNA容易降解，所以最好选用含甲酰胺的超级杂交液(B型本产品)，以便能在42℃完成杂交。
3. 对Oligo探针的杂交，最佳杂交温度一般比Tm低5℃。由于Oligo较短，更容易受各种因素影响(如错配率、修饰碱基比例等)，所以最佳温度需要适度摸索和优化。

三、确定洗膜温度
一般使用0.1×SSC做洗膜液，在此条件下的最佳洗膜温度比Tm低5-12℃，一般情况下可以在55℃进行洗膜。Oligo探针可以室温洗膜。

四、预杂交步骤
预杂交就是用不含探针的本产品跟印迹膜进行孵育，其目的是用所含的非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物将印迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭，否则这些位点会吸附标记的探针，造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的6×SSC溶液中，使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋最好预先封口，再剪掉一角，留一个小口)，按每平方厘米印迹膜加0.2mL超级杂交液的比例沿小口加入超级杂交液，然后用塑料封口机将口封牢。
3. 将此塑料袋浸没入温度设定在最佳杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中，保温1-2小时，延长到12-16小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停的摇动状态中，使超级杂交液与印迹膜充分接触。

五、杂交步骤
1. 如果标记的探针是双链核酸，则需经变性处理。具体操作是将探针样品在沸水浴中加热5分钟，然后迅速置冰浴中。如果是单链DNA或RNA探针，则不需变性，直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪刀剪一小口，加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率而定，一般要求终浓度不能低于1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷贝基因，探针的加入量应加大，而对于检测克隆的基因片段，则探针的量可减少。如果是放射性探针，应将此塑料袋套在另一塑料袋之中，以避免杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3.在选定的杂交温度下继续保温，时间一般为6-12小时。

六、洗膜步骤。注意在下面的所有操作过程中，一定不要使印迹膜干燥。
此步是将与印迹膜非特异结合的探针分子洗去而只留下特异结合的探针分子。由于非特异性杂交的杂交分子解链温度较低，热稳定性较差，在一定的温度和较低的离子强度下，即可洗掉。
1.杂交完毕，取出塑料袋，剪去一角，倒出所有的含探针的杂交液。此含探针的杂交液可以多次使用再倒弃。
2. 剪开杂交袋，用镊子取出印迹膜，浸没于大量的2×SSC(含0.5%SDS)溶液中，室温下振荡漂洗15分钟。
3. 重复上步操作一次。
4. 将印迹膜转移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中，在计算好的洗膜温度下振荡漂洗30分钟至1小时。
5. 重复上步操作一次。如果是同位素标记探针，则需要重复至用盖革计数器在无核酸区域检测不出放射信号为止。
6. 将印迹膜转移到滤纸上，吸去表面液体后印迹膜即可用于后续检测。

疑难解答：
问题一：高背景(有或没有杂交信号)
解决方案：将放射性探针的比活降低到2×10E6 cpm/mL以下；将非放射性探针的终浓度降低到30 ng/mL以下；将探针长度控制在200–800 核苷酸；减少杂交时间；适当提高杂交温度。
问题二：没有杂交信号或杂交信号非常弱
解决方案：杂交过程中应应该连续振荡，不应该有气泡，避免印迹膜变干。将放射性探针活性提高到>5×10E8 cpm/ng，提高非放射性标记探针的终浓度；适当降低杂交温度。

关于超级杂交液(含50%甲酰胺)北京厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·柱式植物RNA大量提取试剂盒
编号：BTN80903
英文名称：Plant RNA Column large-scale extraction kit
规格：5次
本试剂盒是柱式植物RNA提取试剂盒(BTN71203)的大提升级产品，它结合了植物RNA提取试剂盒的高效性(其效果在近五十多种各类植物中得到验证，植物名单见植物RNA提取试剂盒产品介绍的附录)和柱式纯化系列产品的快捷性。

试剂盒特点：
1.样品处理量大，一次可以处理5g的植物材料。
2. 操作简单快速，处理一个样品只需要约二十分钟。
3. RNA 纯度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
4.产量高(具体根据材料不同而不同)。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	100ml
溶液B	30ml
溶液C	100ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算组织细胞的用量。每次大量提取一般需要3-5g植物叶片、或1-3g植物种子、或5-10g植物果实。
2. 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入50mL塑料离心管中，加入20mL溶液A，然后用匀浆器匀浆。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎植物组织，但为避免氧化，砚磨时必须将组织浸泡在溶液A中进行，不能只在液氮中砚磨，然后再将砚磨物转移至干净的50mL塑料离心管中。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3.在离心管中加入5mL的溶液B和5mL自备*仿，在振荡器上充分振荡1-3分钟，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000～15000g离心3～5分钟，水相和有机相之间将有较厚的细胞破碎物。
5. 将上清液转移到另一干净的50mL塑料离心管中。下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下少量上清液不取。
6. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
7. 将一半的溶液转移到大提离心吸附柱中，13000-15000g室温离心3～5分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液转移到同一大提离心吸附柱中，13000-15000g室温离心3～5分钟，弃穿透液。
9. 加10mL 通用洗柱液，室温离心3～5分钟，弃穿透液。
10. 重复上步一次，加10mL 通用洗柱液，室温离心3～5分钟，弃穿透液。
11.室温离心1-3分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将大提离心吸附柱转移到一个自备的RNase-free 收集管中，加入0.5mLRNA 洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 13000-15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品。
14. 再加入0.5mL RNA 洗脱液，重复上面两步一次。
15. 将两次洗脱得到的RNA 立即使用或存放于-80℃待用
16. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
17. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
18. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。


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SV0955 T4 DNA 聚合酶
BTN100865 20% PVP K30溶液(DNA级)
KFS093 Western转膜液(干粉)
SY0320 10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂) 10×RIPA Lysis Buffer (Medium),without enzyme inhibitors
SV0036 AleI限制性内切酶 AleI Restriction Endonuclease
BTN130527 哺乳动物专用蛋白酶抑制剂 Protease Inhibitor for Mammal
HR0121 神经元蛋白提取试剂盒 Neuron protein extraction kit
YT912 伊红染色液 Eosin Staining Solution
YT056 考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法) Coomassie Blue Staining Kit
BTN80204 柱式RNA纯化试剂盒 RNAadsorp RNA Column Purification Kit
SV1471 SHuffle 表达 E. coli 感受态细胞
YT256 STAT3凝胶迁移突变探针(1.75μM) STAT3 Mutation Probe For EMSA(1.75μM)
KFS336 Ki67细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法) Ki67 cell proliferation Detection Kit
SY0582 碘化丙啶(PI)染液(即用型) PI Staining Solution (Ready-to-use)
SV0723 SphI-HF限制性内切酶 SphI-HF Restriction Endonuclease
WE0245 1kb DNA Ladder
HR0863 活性氧检测试剂盒DCFHDA Active oxygen detection kit DCFHDA
SY0216 FXR-GFP报告基因质粒 FXR GFP Reporter Plasmid
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·耐热型MMLV逆转录酶(无RNase H活性)
编号：BTN131210
英文名称：Thermal Stable MMLV Reverse Transcriptase (H-)
规格：10000U
本产品为点突变型M-MLV逆转录酶(RNase H缺失)，拥有RNA和DNA聚合酶活性，但由于在RNase H结构域内进行了点突变，该酶缺少RNase H的活性，不会降解第一链CDNA 合成时形成的RNA-DNA 复合物中的RNA，从而可以从长模板中获得高产量的全长cDNA。缺失了RNase H活性的逆转录酶为长cDNA的制备及包含高比例全长cDNA的文库制备提供了更好的选择。

产品特点：
1．温度稳定性，点突变产物的热稳定性可防止与二级结构相关的问题，增强了与模板的亲和力。
2．能够在较宽的温度范围内保持活性，在42-45℃之间具有最佳活性，在温度高达55℃时仍有活性。
3．聚合酶活性增强，本产品与其它缺失突变得到的M-MLV 逆转录酶相比，具有更高的cDNA产率。
4．高产量制备全长的第一链cDNA，最长可达13kb。合成时可掺入带有修饰的核苷酸(例如 Cy3-、Cy5-、罗丹明-、*基烯丙基-、荧光素-标记的核苷酸)。
5．广泛的工作范围：提高了逆转录的性能，使得可以在更广泛的酶浓度和底物浓度的条件下工作。

产品组成：

成分	规格
耐热型MMLV逆转录酶(H-)，200U/μL	50μl
5×RT Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1．在无RNase的PCR管中加入如下成分：

成分	用量
▶RNA模板
Total RNA 或poly(A)RNA 或specific RNA	0.1ng-5μg 10pg-500ng 0.01 pg-0.5μg
▶引物
Oligo dT18 或随机引物 或基因特异引物	0.5μg(100pmol) 0.2μg(100 pmol) 15-20 pmol
▶RNase-free水	Up to 12.5μL

2．对富含二级结构的高GC RNA模板，65℃保温5分钟后迅速冰浴2-10分钟。
3．离心数秒使反应液聚集于PCR管底部。
4．按顺序向上述反应液中加入下表各成分，反应终体积为20μL：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor	0.5μL(20U)
dNTP Mix，10mM each	2μL(终浓度1mM)
耐热型MMLV逆转录酶(H-)	1μL(200U)

 轻柔混匀，短暂离心。
5．42℃保温60分钟(Oligo dT18或基因特异引物)；如果是随机引物则先在25℃保温10分钟，然后再转移至42℃保温60分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板保温温度可以设为55℃。
6．70℃保温10分钟终止反应后置冰上冷却，得到cDNA。该产物可直接用于PCR扩增或-20℃保存。

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