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938
- 英文名:
Southern DNA Marker DL2000(Labeled by DIG)
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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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冷藏
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")Southern DNA Marker DL2000(DIG标记)多少钱,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:Southern DNA Marker DL2000(DIG标记)多少钱
编号:BTN120654D
规格:20次
英文名:Southern DNA Marker DL2000(Labeled by DIG)
品牌:百奥莱博
产地:北京
欲了解更多Southern DNA Marker DL2000(DIG标记)多少钱的品牌、产地、价格及说明书等产品信息,请致电北京百奥莱博科技有限公司,我们将竭诚为您服务,另外,以下产品正在火爆促销:
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Southern DNA Marker DL2000(DIG标记)多少钱关键词:BTN120654D,Southern DNA Marker DL2000(DIG标记),Southern DNA Marker DL2000(Labeled by DIG)
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Southern DNA Marker DL2000(DIG标记)多少钱关键词:BTN120654D,Southern DNA Marker DL2000(DIG标记),Southern DNA Marker DL2000(Labeled by DIG)
·柱式BAC载体DNA提取试剂盒
编号:BTN90607
英文名称:BAC carrier DNA column extraction kit
规格:50次
BAC是专门用于克隆长片段插入片段的载体,可以插入的片段一般在30-300 Kb,平均长度为130 Kb。但用常规的质粒DNA提取方法提取15 Kb以上的质粒DNA效果都不尽人意,为此本公司对常规的方法进行了诸多改良。
试剂盒特点:
1. 使用于不超过 100 kb的大型质粒DNA,包括BAC、PAC、P1和Cosmid等。如果超过100 kb,建议使用沉淀法或离子交换法。
2. 每 mL细菌培养液可纯化到50-150 ng左右的BAC和其他大型质粒DNA。
3. 安全,无酚*仿等危险的有机物抽提。
4. 柱式操作,比经典的沉淀法操作简单,重复性好,每次都能获得理想效果。
5. 得到的DNA 纯净,可以直接用于PCR、酶切和测序,不需要再纯化。
6.超值,性价比高。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 13ml |
| 溶液B | 13ml |
| 溶液C | 18ml |
| RNase A溶液(10mg/mL) | 0.75ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存(RNase A溶液需要4℃保存),有效期一年。
使用方法:
1. 接种单个菌落到 2-5mL LB培养基中,37℃摇晃过夜培养。注意:不要使用Terrific Broth或2×YT培养基等高营养培养基,因为这样得到的菌液细菌密度太高,纯化BAC时,蛋白质和RNA污染较多,反而会影响BAC的产率。
2. 12000~15000×g 4℃离心5分钟,弃上清(培养基),再短暂离心,吸弃残留液体(培养基),得到细菌沉淀。
3. 用 250μL溶液A(第一次用前需先将全部RNase A溶液加入到13mL溶液A中,摇匀后再取用。未用完的溶液A最好在4℃保存)重悬细胞沉淀,必要时用枪头充分吹打使菌体重悬已保证没有成团的细菌块。
4. 冰上放置5分钟。
5. 加入250μL溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀4-6次,看到溶液变粘即可。此步处理不能超过5分钟,否则DNA的碱损伤比较严重。千万不要剧烈振荡,否则基因组DNA 断裂产生的片段非常容易污染BAC DNA。
6. 冰上放置4分钟。注意:一定要严格控制时间,时间超过4分钟,BAC产率将大大降低。
7. 加入350μL溶液C,轻柔颠倒混匀4-6次,可见白色沉淀物产生。
8. 冰上放置5分钟。
9.室温 12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。
10. 静置 2分钟以让BAC DNA与吸附柱充分结合,此步十分重要。
11.室温 12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。
13. 重复上步1次。
14.室温 12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管(自备)中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA 洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA 洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。
16.室温 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即BAC DNA。
17. 由于百奥莱博的吸附柱结合DNA 能力较强,如果再加适量DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多BAC DNA(相当于第一次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的DNA 洗脱液来洗脱。
18. 得到的BAC DNA即可用于后续的检测或实验。
其他处理:
1. 如果要制备无内毒素BAC DNA,则需要用液相内毒素清除剂(需要另购)处理BAC DNA溶液。或者在提取BAC DNA之前,用菌体内毒素清除剂(需要另购)处理细菌。
2. 如果有基因组 DNA污染,可以用线状DNA 清除剂(需要另购)将其酶解。
3. 如果有 RNA污染,可以加入RNase酶解,然后用酚*仿抽提,再用乙醇沉淀。
4. 如果有蛋白质污染,可以用酚*仿抽提,再用乙醇沉淀。
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