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- 百奥莱博
- BTN131178-LKJ
- 北京
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
558
- 英文名：
DNA Shuffling Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。使用方法：1.待突变基因片段的制备：待突变基因片段可以用含此基因的质粒为模板、用PCR法或酶切法制备。制备时需保证含此基因(或此基因的一部分)的DNA片段总长度不要超过1kb，同时比DNA shuffling终产物(第二轮PCR产物)长200-400bp。每次DNA Shuffling实验至少需要2μg起始DNA片段(如果含几个基因片段，则彼此的比例为1:1)，并且必须通过胶回收的方法回收，以便彻底去除残留的质粒模板、引物和非特异扩增产物等。最后需用分光光度法准确定量。2.提前准备37℃和75℃水浴，同时新鲜配制0.1U/μL的DNase工作液放冰上待用(必须在用时才配制，方法是将1μl 本试剂盒提供的1U/μL的DNase I溶液和1μl溶液A和8μl超纯水混合)。此溶液需在24小时内使用。3.在一个离心管中，按顺序加入下列成分：<table width=450 border=1 style="border-collapse:collapse;text-align:center;border:black;"><tr style="text-align:center;font-weight:bold;border-bottom:3px solid;background-color:#D7D1F8;"><td>成分<td>用量<tr><td>待突变基因片段(第1步制备)<td>2μg<tr><td>溶液A<td>5μl<tr><td>溶液B<td>5μL<tr><td>DNase I工作液(第2步制备)<td>2μL<tr><td>超纯水<td>36μL</table>4.充分轻柔吹打混匀后37℃水浴8分钟，然后立即放75℃水浴处理10分钟以灭活DNase I。5.在2-3%琼脂糖凝胶上电泳，用常规的胶回收法回收25-150bp范围的所有片段待用。注意：一定要加合适的DNA marker以便确定片段范围，最好使用本公司生产的绿如蓝核酸染料(可见光型)作为电泳染料以避免用UV照射DNA，否则UV使DNA发生的交联将极大降低后续扩增效果。6.分光光度法精确测定回收片段的浓度。7.在PCR管中按顺序加入0.5μg上步回收得到的回收片段、50μl 2×PCR Mix、加超纯水到100μl。8.按下面的PCR反应参数进行第一轮无引物PCR：<table width=450 border=1 style="border-collapse:collapse;text-align:center;border:black;"><tr style="text-align:center;font-weight:bold;border-bottom:3px solid;background-color:#D7D1F8;"><td>过程<td>温度<td>时间<tr><td>PCR前变性<td>94℃<td>150s<tr><td rowspan=3>PCR反应(40循环)<td>94℃<td>30s<tr><td>47.5℃<td>45s<tr><td>72℃<td>10s，每次循环后增加5s<tr><td>PCR后延伸<td>72℃<td>10min<tr><td></table>9.取5-10μl进行电泳检测，然后进行PCR回收，得到第一轮PCR产物。10.将回收的第一轮PCR产物1μl原液作为模板设置3管第二轮PCR反应。<table width=450 border=1 style="border-collapse:collapse;text-align:center;border:black;"><tr style="text-align:center;font-weight:bold;border-bottom:3px solid;background-color:#D7D1F8;"><td>成分<td>用量<tr><td>回收的第一轮PCR产物<td>1μL<tr><td>PCR Mix 3.0，2×<td>50μL<tr><td>自备DNA Shuffling引物<td>各1μM<tr><td>超纯水<td>加水到100μL</table>11.按下列PCR参数进行第二轮PCR。<table width=450 border=1 style="border-collapse:collapse;text-align:center;border:black;"><tr style="text-align:center;font-weight:bold;border-bottom:3px solid;background-color:#D7D1F8;"><td>过程<td>温度<td>时间<tr><td>活化<td>94℃<td>150s<tr><td rowspan=3>PCR反应(25次循环)<td>94℃<td>30s<tr><td>47.5℃<td>45s<tr><td>72℃<td>60s，每次循环后增加5s<tr><td>PCR后延伸<td>72℃
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应北京DNA Shuffling试剂盒品牌，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称：DNA Shuffling试剂盒
编号：BTN131178
规格：10次
英文名：DNA Shuffling Kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
DNA Shuffling即DNA分子的体外同源重组，它是一种分子水平上的定向进化(directed evolution)技术，它以一个或多个基因为起始材料，通过先随机断裂成小片段，再进行互为模板和引物的PCR(无外加引物)，最后再进行常规PCR(外加引物)等处理，最后得到含有大量DNA重组突变的PCR产物。其原理示意图如下：
产品特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板，无需单独准备各成分。
2.操作手册经过优化，1-2天即可完成，节省大量优化时间。
3.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| PCR Mix 3.0，2× | 1.5mL |
| DNase I溶液(1U/μL) | 10μl |
| 溶液A，10× | 60μl |
| 溶液B，10× | 60μl |
| 超纯水 | 1mL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法：
1.待突变基因片段的制备：待突变基因片段可以用含此基因的质粒为模板、用PCR法或酶切法制备。制备时需保证含此基因(或此基因的一部分)的DNA片段总长度不要超过1kb，同时比DNA shuffling终产物(第二轮PCR产物)长200-400bp。每次DNA Shuffling实验至少需要2μg起始DNA片段(如果含几个基因片段，则彼此的比例为1:1)，并且必须通过胶回收的方法回收，以便彻底去除残留的质粒模板、引物和非特异扩增产物等。最后需用分光光度法准确定量。
2.提前准备37℃和75℃水浴，同时新鲜配制0.1U/μL的DNase工作液放冰上待用(必须在用时才配制，方法是将1μl 本试剂盒提供的1U/μL的DNase I溶液和1μl溶液A和8μl超纯水混合)。此溶液需在24小时内使用。
3.在一个离心管中，按顺序加入下列成分：
| 成分 | 用量 |
| 待突变基因片段(第1步制备) | 2μg |
| 溶液A | 5μl |
| 溶液B | 5μL |
| DNase I工作液(第2步制备) | 2μL |
| 超纯水 | 36μL |
4.充分轻柔吹打混匀后37℃水浴8分钟，然后立即放75℃水浴处理10分钟以灭活DNase I。
5.在2-3%琼脂糖凝胶上电泳，用常规的胶回收法回收25-150bp范围的所有片段待用。注意：一定要加合适的DNA marker以便确定片段范围，最好使用本公司生产的绿如蓝核酸染料(可见光型)作为电泳染料以避免用UV照射DNA，否则UV使DNA发生的交联将极大降低后续扩增效果。
6.分光光度法精确测定回收片段的浓度。
7.在PCR管中按顺序加入0.5μg上步回收得到的回收片段、50μl 2×PCR Mix、加超纯水到100μl。
8.按下面的PCR反应参数进行第一轮无引物PCR：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| PCR前变性 | 94℃ | 150s |
| PCR反应(40循环) | 94℃ | 30s |
| 47.5℃ | 45s | |
| 72℃ | 10s，每次循环后增加5s | |
| PCR后延伸 | 72℃ | 10min |
9.取5-10μl进行电泳检测，然后进行PCR回收，得到第一轮PCR产物。
10.将回收的第一轮PCR产物1μl原液作为模板设置3管第二轮PCR反应。
| 成分 | 用量 |
| 回收的第一轮PCR产物 | 1μL |
| PCR Mix 3.0，2× | 50μL |
| 自备DNA Shuffling引物 | 各1μM |
| 超纯水 | 加水到100μL |
11.按下列PCR参数进行第二轮PCR。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 活化 | 94℃ | 150s |
| PCR反应(25次循环) | 94℃ | 30s |
| 47.5℃ | 45s | |
| 72℃ | 60s，每次循环后增加5s | |
| PCR后延伸 | 72℃ | 10min |
12.电泳检测，回收预期大小的PCR产物，用于后续的构建克隆文库实验(略)。
疑难解答：
Q：易错PCR和DNA Shuffling有何区别？
A：前者引入的是点突变，后者引入的是重组突变。示意图如下：
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