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Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin)
一年
北京百奥莱博科技有限公司
低温运输,-20℃保存,有效期一年。使用方法:1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分:<table width=500 border=1 style="border-collapse:collapse;text-align:center;border:black;"><tr style="text-align:center;font-weight:bold;border-bottom:3px solid;background-color:#D7D1F8;"><td>成分<td>用量<tr><td>模板DNA<td>50-150ng<tr><td>2×标记反应液(ABC三种之一)<td>10μl<tr><td>超纯水<td>补水到15μl</table>注意:非同位素标记物由于疏水性强,容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合,所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好,因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交,竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。2. 沸水浴5-10分钟,或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性,立即放冰上待用。注意:如果PCR仪器不能设置到100℃,99℃加热5分钟也可。3.高速离心数秒使所有液体集中在管底,根据试剂盒类型加入下列成份:<table width=500 border=1 style="border-collapse:collapse;text-align:left;border:black;"><tr style="text-align:center;font-weight:bold;border-bottom:3px solid;background-color:#D7D1F8;"><td>试剂盒类型<td>成分及用量<tr><td>BTN90603A型<td>dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL,浓度均为2mM)自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL1μl Klenow exo聚合酶<tr><td>BTN90603B型<td>1μl Klenow exo聚合酶4μl超纯水<tr><td>BTN90603C型<td>1μl Klenow exo聚合酶4μl超纯水</table>注:上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM,dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍,并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高,一般dTTP与标记dUTP的比例在65:35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸,如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP,则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例,如果使用32P标记的dUTP,则比活最好为3000Ci/mmol,浓度为好为10uCi/μL,并且不需要加入dTTP。4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关,具体见下表:<table width=500 border=1 style="border-collapse:collapse;text-align:center;border:black;"><tr style="text-align:center;font-weight:bold;border-bottom:3px solid;background-color:#D7D1F8;"><td>模版DNA用量<td>1小时后探针合成量<td>20小时后探针合成量<tr><td>10ng<td>80ng<td>900ng<tr><td>30ng<td>150ng<td>1.35μg<tr><td>100ng<td>350ng<td>1.65μg<tr><td>300ng<td>750ng<td>2.2μg<tr><td>1μg<td>1.3μg<td>2.6μg<tr><td>3μg<td>1.6μng<td>2.6μg</table>6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应,立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒 是高品质的探针标记及检测产品,由北京百奥莱博供应,用于生化科学研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒等探针标记及检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒 探针标记及检测
编号:BTN90603B
规格:5次
英文名:Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin)
品牌:百奥莱博
产地:北京
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒,标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下,引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成,可用下面的示意图表示:
本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。
产品特点:
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分,简化了反应加样步骤,提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶,已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速,最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素,可以达到109cpm/μg DNA),检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可),DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的,长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间,可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择,其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记,但需自备标记底物;BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记,不需自备标记底物。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
2×A型标记反应液(自备标记物型) | 50μl(仅A型有) |
2×B型标记反应液(生物素型) | 50μl(仅B型有) |
2×C型标记反应液(DIG型) | 50μl(仅C型有) |
dATP,2mM | 10μL(仅A型有) |
dTTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
dGTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
dCTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
Klenow exo-聚合酶(2U/μL) | 5μl |
超纯水 | 1ml |
说明书 | 1份 |
成分 | 用量 |
模板DNA | 50-150ng |
2×标记反应液(ABC三种之一) | 10μl |
超纯水 | 补水到15μl |
试剂盒类型 | 成分及用量 |
BTN90603A型 | dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL,浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶 |
BTN90603B型 | 1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水 |
BTN90603C型 | 1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水 |
模版DNA用量 | 1小时后探针合成量 | 20小时后探针合成量 |
10ng | 80ng | 900ng |
30ng | 150ng | 1.35μg |
100ng | 350ng | 1.65μg |
300ng | 750ng | 2.2μg |
1μg | 1.3μg | 2.6μg |
3μg | 1.6μng | 2.6μg |
北京百莱博科技有限公司专业生产探针标记及检测产品,欢迎来电咨询选购随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒 探针标记及检测。
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