随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒 探针标记及检测

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随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒 是高品质的探针标记及检测产品，由北京百奥莱博供应，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒等探针标记及检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒 探针标记及检测
编号：BTN90603B
规格：5次
英文名：Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin)
品牌：百奥莱博
产地：北京
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒，标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示：

本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。

产品特点：
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速，最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素，可以达到109cpm/μg DNA)，检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的，长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间，可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择，其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记，但需自备标记底物；BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记，不需自备标记底物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
2×A型标记反应液(自备标记物型)	50μl(仅A型有)
2×B型标记反应液(生物素型)	50μl(仅B型有)
2×C型标记反应液(DIG型)	50μl(仅C型有)
dATP,2mM	10μL(仅A型有)
dTTP,2mM	10μL(仅A型有)
dGTP,2mM	10μL(仅A型有)
dCTP,2mM	10μL(仅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×标记反应液(ABC三种之一)	10μl
超纯水	补水到15μl

注意：非同位素标记物由于疏水性强，容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合，所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好，因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交，竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟，或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性，立即放冰上待用。注意：如果PCR仪器不能设置到100℃，99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底，根据试剂盒类型加入下列成份：

试剂盒类型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水

注：上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM，dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍，并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高，一般dTTP与标记dUTP的比例在65：35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP，则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例，如果使用32P标记的dUTP，则比活最好为3000Ci/mmol，浓度为好为10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关，具体见下表：

模版DNA用量	1小时后探针合成量	20小时后探针合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链，然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。
 注意：本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针，因为这些标记分子疏水性强，能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针，由于其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。

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·柱式Ti质粒DNA提取试剂盒
编号：BTN130954
英文名称：Ti plasmid DNA column extraction kit
规格：50次

·DNA稀释液
编号：BTN121206
英文名称：DNA Diluent
规格：100mL
本产品为专门用于稀释核酸探针、模板等珍贵样品的稀释溶液。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·Southern级血液DNA提取试剂盒
编号：BTN130931
英文名称：Blood DNA extraction kit(Southern Grade)
规格：10次
本产品为专门用于稀释核酸探针、模板等珍贵样品的稀释溶液。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·可逆型Taq DNA聚合酶抑制剂
编号：BTN60901
英文名称：Taq DNA Polymerase Inhibitor
规格：0.3mL
Taq DNA聚合酶是进行PCR的最常用工具酶，但是由于它在常温下还是具有部分活性，所以经常会出现非特异的扩增产物，尤其是当PCR反应体系中有大量非特异DNA存在的时候。目前最常见的解决方法是使用抗Taq DNA聚合酶的抗体和使用经过化学修饰的热启动Taq DNA聚合酶(如AmpliTaq Gold)，但前者的缺点是加热后抗体会不可逆失活，后者的缺点是需要预热处理使酶激活。

产品特点：
1.可逆抑制Taq DNA聚合酶的活性，即常温抑制Taq酶活性，在45℃以上抑制功能丧失，当温度降低到45℃以下后，抑制活性又得以恢复。
2. 耐热，产品本身为非蛋白质试剂，远比Anti-Taq抗体稳定，便于保存和运输。
3. 使用简单，在加Taq酶前将本产品按PCR反应体积的1/10直接加入即可。
4.适用范围广，除Taq DNA聚合酶外，还可用于抑制其他DNA聚合酶的活性，如：Tth pol、Stoffel片段、Tfl pol、Tbr pol等。而一种酶的抗体一般对另一种酶的活性没有抑制作用。
5.与后续的RT-PCR兼容。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
在加入Taq或Tth DNA聚合酶之前，按PCR反应终体积1/10的比例将本产品加入到反应体系中混匀，然后再加入DNA聚合酶，启动PCR反应。

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