酵母tRNA溶液(粗提)品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应酵母tRNA溶液(粗提)品牌，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：酵母tRNA溶液(粗提)品牌
编号：BTN70904A
规格：1.5mL
英文名：Yeast tRNA Solution
品牌：百奥莱博
产地：北京
本产品分粗体液和精提液两种类型，浓度均为5mg/mL。A是酵母tRNA粗提液，用作制备更高纯度(如分子生物级)酵母tRNA的原材料。B是精提液，是经过本公司柱式RNAadsorp纯化的分子生物学级别的酵母tRNA溶液，不含蛋白质和DNA污染，OD260/OD280在1.9左右，可直接用作微量RNA提取和回收的助沉剂，也可以用作原位杂交、Northern杂交的封堵剂，对于探针为RNA的杂交试验尤其适用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：以tRNA粗提液(BTN70904A)为材料，酚法制备tRNA精提液(BTN70904B)
1.在1倍体积的tRNA粗提液中加入一倍体积的自备Tris饱和酚，振荡混匀后12000～15000g离心3分钟得上清。
2.在上清中再加入一倍体积的自备Tris饱和酚和0.2倍体积自备的*仿，振荡混匀后12000～15000g离心3分钟得上清。
3. 重复此步直到酚相和水相之间没有白膜出现。一般需要2-4次抽提。
4.在上清中加入0.1倍体积的自备3M NaAc(pH5.2)和2倍体积的自备无水乙醇，振荡混匀。
5. 12000～15000g离心15分钟以上，小心移弃上清。
6. 用1mL自备 75%乙醇洗一次(即加入1mL 75%乙醇，振荡混匀后12000～15000g离心5分钟，小心移弃上清)。
7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体，所得沉淀即是精提的酵母tRNA，可以溶解在自备的DEPC水中，UV测定其浓度，然后直接用于各种分子生物学实验。
注意：tRNA比较短，又是单链，所以电泳时结合EB等染料的能力很弱，测定其浓度时最好不要使用电泳比较法，而要使用分光光度法。
注意：此法得率较高，但缺点是不能去除部分多糖污染，因为多糖也能在醇沉淀时沉淀下来。如果最后得到的溶液带颜色，则需要用本公司柱式RNAadsorp精提，详细过程见该产品使用说明书。

二：tRNA精提液(BTN70904B)作为核酸助沉剂
1.在核酸(DNA或/和RNA)溶液中，加入适当浓度的盐离子，盐离子不同其终浓度也不相同，具体如下：

 

盐	终浓度
NH4OAc(醋酸铵)	0.5M
NaCl(*化*)	0.25M
NaOAc(醋酸*)	0.3M

2. 加入本产品使其终浓度为20μg/mL，混合均匀。
3. 加入两倍体积的乙醇，混合均匀。
4. 冰上放置15分钟。
5. 12000～15000g离心15分钟以上，小心移弃上清。
6. 用1mL 75%乙醇洗一次(即加入1mL 75%乙醇，振荡混匀后12000～15000g离心5分钟，小心移弃上清)。
7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体。
8. 将沉淀溶于适当缓冲液中待用。
注：由于tRNA是多聚核苷酸激酶和末端转移酶的底物，因此如果回收的DNA或RNA要用于此类反应，就不能使用tRNA作为助沉剂。如果回收的RNA要用于RT-PCR，使用tRNA可能会对反应的特异性产生干扰。

三：tRNA精提液(BTN70904B)作为杂交封堵剂
本产品可以作为原位杂交、Northern杂交和RNA斑点杂交的封堵剂，也可以作为Southern杂交和DNA 斑点杂交的封堵剂，但不适于作为菌斑杂交。其在杂交液或预杂交液中的终浓度为100μg/mL。
如果使用RNA探针，最好使用本产品做封堵剂，以保护RNA探针。

酵母tRNA溶液(粗提)品牌极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：
SY0360 通用型Western Blot电泳电转缓冲液 Universal Electrophoresis and Transfer Buffer (for Western Blot)
KFS131 神经示踪剂—FM 1-43
YT050 SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X) SDS-PAGE Sample Loading Buffer，1X
SV1023 E. coli DNA 连接酶
BTN90802 柱式DNA污染清除剂(大处理量) Maxi Column DNA Scavenger
BTN140648 PCR污染清除剂 DNA Contamination Scavenger
YT403 T4 DNA聚合酶 T4 DNA Polymerase
ALH072 组织细胞miRNA提取试剂盒 Tissue Cell microRNA Extraction Kit
BTN91107 SP6体外转录试剂盒 SP6 in vitro Transcription Kit
BTN100914 10%Sarkosyl溶液(DNA级)
SY0112 STAT5-Luc荧光素酶报告基因质粒 STAT5 luciferase reporter plasmid 
HR0388 蛋白浓缩柱 Protein concentration column
BTN131013 ATP溶液，1mM ATP adenosine triphosphate Solution，1 mM
SV0429 Hpy166II限制性内切酶 Hpy166II Restriction Endonuclease
SY0474 细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor 488/PI) Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
KFS234 TRADD蛋白检测试剂盒 TRADD Detection Assay(Western Blot)
YT149 罗丹明123 Rhodamine 123
SV1306 pBR322 DNA-Msp I 消化
BTN81107 无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒 Endotoxin-free plasmid DNA large-scale extraction kit
WE0289 SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×) SDS-PAGE Loading Buffer(non-Reducing，5×)
YT563 R-ω转*酶 ω-Transaminase(R-amine) (Crude Enzyme)
酵母tRNA溶液(粗提)品牌关键词：酵母tRNA溶液(粗提),BTN70904A,Yeast tRNA Solution


·细胞核微量制备试剂盒
编号：BTN100601
英文名称：Nuclei Miniprep Kit
规格：50次
用高密度介质来分离动物软体组织(如肝脏、脾脏等)细胞核是目前主流的方法，它是由Chauveau于1956年发明，其原理是细胞核的密度较大，在高速离心条件下(40000g 1小时)可在高密度介质(2.2mol/l 蔗糖溶液)中沉降下来，从而达到与细胞质其它成分分开的目的。该方法能通过一步离心得到较高纯度的细胞核，得到广泛应用。本产品就是在Chauveau方法的基础上优化改进而来。

产品特点：
1．基于密度梯度分离，可有效去除细胞质及其他细胞器，得到的细胞核纯净。
2．加进*化*、*化*、*化*(代"*")等改变分离介质渗透压的物质，减少了细胞核的脆性，增加了细胞核的完整性。
3．精心调节了介质的pH，防止细胞核在分离过程中的聚集，还能保持细胞核的精细结构。
4．快速，整个操作过程仅需1小时即可完成(对一个样品而言)。
5．提供染色试剂，可以在普通光学显微镜下检测纯化的细胞核的纯度。
6．处理温和，得到的细胞核中的大部分蛋白质都具有活性，可以用于胶迟阻实验、酶活性分析细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究；也可用于超大片段DNA的纯化。
7．不但适用于动物和植物培养细胞，还能用于实体组织(能用Dounce或Potter 匀浆器匀浆的组织均可)。
8．一次微量提取足够处理0.1 克组织或10E7个培养细胞，本产品足够50次微量提取。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A成分一	100ml
溶液A成分二(干粉)	约20g
溶液B成分一	50ml
溶液B成分二(干粉)	约100g
细胞核染色液	1套
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：

一、准备工作：先将溶液A的成分二(干粉)全部加入到溶液A成分一(溶液)中，摇晃溶解后得到100mL溶液A。将溶液B的成分二(干粉)全部加入到溶液B成分一(溶液)中，摇晃溶解后得到50mL溶液B。4℃放置不能超过2 天，长期放置需要放-20℃。

二、微量细胞核分离(放量提取各试剂的用量可以按比例放大)：
1．对组织细胞：称取100～200mg 新鲜组织(如动物肝脏、脑、心肌和植物叶片等)，用自备的PBS或生理盐水洗净血水，滤纸吸干，用剪刀或刀片将其剪为碎块(最好大小为1cm3，过小反而不利于匀浆)放入小容量Dounce或Potter 玻璃匀浆器内。
2．对培养细胞：用自备胰酶按标准方法消化培养细胞，PBS 洗涤，800×g 5～10分钟离心收集细胞，计数。每次微量提取需要5×10E7个细胞，加入1.0mL预冷的溶液A重悬细胞，然后转移到小容量Dounce或Potter 玻璃匀浆器内
3．用Dounce或Potter 组织匀浆器在冰上破碎组织或细胞。如果用手动匀浆器，一般需要20～30次。如果用电动匀浆器，一般需要处理3-5次，每次5～10秒钟(转速为500r/min)。
4．将匀浆液转移到离心管中。如果匀浆液有可见的结缔组织和未破碎的组织块，可以用三层自备的纱布放在1.5mL离心管管口，将匀浆液过滤进入离心管。可取少量滤液涂在载玻片上制得涂片A，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
5．4℃，700-800×g 水平离心5-10分钟。细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。可取少量上清液涂在载玻片上制得涂片B，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
6．加入0.5mL预冷溶液A重悬沉淀。用预冷的匀浆器(用前需要将表面的组织洗去)重悬沉淀。可取少量上清液涂在载玻片上制得涂片C，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
7．在水平型离心管中加入0.5mL预冷的溶液B，然后靠管壁慢慢加入上步得到的重悬液。
8．在4℃ 23000g离心30分钟，管底的沉淀即为细胞核。
9．小心吸弃上清液。注意：上清一般比较粘稠，最好倒立一段时间。
10．用0.5mL溶液A重悬沉淀。
11．在4℃ 1500g离心5分钟，吸弃上清，沉淀即为纯净的细胞核。可以直接使用，也可以加等体积的自备甘油，混匀后放液氮或-70℃保存。可取少量上悬浮液涂在载玻片上制得涂片D，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
12．用本方法一般可以从0.1g 肝脏组织中纯化到1-2×107个细胞核。如果后续试验是Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解细胞核后上样。

三、显微镜检测涂片，计算效率
1．将干燥后的A-D 四张涂片加入固定液固定15分钟，晾干。
2．Giemsa 染液染10分钟。
3．自备蒸馏水漂洗数秒，用滤纸吸干水。
4．用显微镜(40×)检查涂片，细胞核将呈紫红色，混杂的细胞质为浅蓝色碎片。根据每步细胞核的数量可以粗略估计回收效率。

疑难解答：
本说明书强烈建议用离心力g 而不是转速计算所需的离心速度，因为不同的离心机转子直径不同，即使是同一转速，其离心力也不同。如果只知道转速，可用下式计算离心力。
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G为离心力，一般以g(重力加速度)的倍数来表示；[rpm]２即转速的平方；
R为离心机转子的半径(单位为厘米)。


酵母tRNA溶液(粗提)品牌关键词：酵母tRNA溶液(粗提),BTN70904A,Yeast tRNA Solution

BTN130637 Tma核酸内切酶III Tma Endonuclease III
SV0723 SphI-HF限制性内切酶 SphI-HF Restriction Endonuclease
SY0581 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒 Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit
KFS336 Ki67细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法) Ki67 cell proliferation Detection Kit
SV0155 BsaBI限制性内切酶 BsaBI Restriction Endonuclease
SV1470 SHuffle T7 表达 E. coli 感受态细胞
BTN80204 柱式RNA纯化试剂盒 RNAadsorp RNA Column Purification Kit
YT055 考马斯亮蓝快速染色液 Coomassie Blue Fast Staining Solution
YT912 伊红染色液 Eosin Staining Solution
HR0121 神经元蛋白提取试剂盒 Neuron protein extraction kit
BTN131052 β-巯基乙醇(蛋白级) β-Mercaptoethanol，Protein Grade
YT408 T3 RNA聚合酶 T3 RNA Polymerase
SY0320 10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂) 10×RIPA Lysis Buffer (Medium),without enzyme inhibitors

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