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- 详细信息
- 技术资料
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569
- 英文名:
Lambda DNA
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
低温运输、-20℃保存、有效期一年。纯度:1. OD260nm/280nm>1.8。2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后,琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃)
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应λDNA北京现货促销,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:λDNA北京现货促销
编号:BTN90407A
规格:5μg
英文名:Lambda DNA
品牌:百奥莱博
产地:北京
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA,是一种常见的DNA底物,分子量为31.5×106Da/48502bp,浓度为200~500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA,是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。
储存溶液:Tris-HCl(pH8.0)10mM;EDTA 1mM
储存条件:低温运输、-20℃保存、有效期一年。
纯度:
1. OD260nm/280nm>1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后,琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃,2小时)后,在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。
欲咨询购买λDNA北京现货促销,请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供最全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:
·随机引物法DNA探针标记试剂盒
编号:BTN90603A
英文名称:Random Primer DNA Labeling Kit
规格:5次
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒,标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下,引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成,可用下面的示意图表示:

本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。
产品特点:
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分,简化了反应加样步骤,提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶,已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速,最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素,可以达到109cpm/μg DNA),检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可),DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的,长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间,可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择,其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记,但需自备标记底物;BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记,不需自备标记底物。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 2×A型标记反应液(自备标记物型) | 50μl(仅A型有) |
| 2×B型标记反应液(生物素型) | 50μl(仅B型有) |
| 2×C型标记反应液(DIG型) | 50μl(仅C型有) |
| dATP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dTTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dGTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| dCTP,2mM | 10μL(仅A型有) |
| Klenow exo-聚合酶(2U/μL) | 5μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分:
| 成分 | 用量 |
| 模板DNA | 50-150ng |
| 2×标记反应液(ABC三种之一) | 10μl |
| 超纯水 | 补水到15μl |
注意:非同位素标记物由于疏水性强,容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合,所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好,因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交,竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟,或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性,立即放冰上待用。注意:如果PCR仪器不能设置到100℃,99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底,根据试剂盒类型加入下列成份:
| 试剂盒类型 | 成分及用量 |
| BTN90603A型 | dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL,浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶 |
| BTN90603B型 | 1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水 |
| BTN90603C型 | 1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水 |
注:上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM,dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍,并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高,一般dTTP与标记dUTP的比例在65:35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸,如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP,则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例,如果使用32P标记的dUTP,则比活最好为3000Ci/mmol,浓度为好为10uCi/μL,并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关,具体见下表:
| 模版DNA用量 | 1小时后探针合成量 | 20小时后探针合成量 |
| 10ng | 80ng | 900ng |
| 30ng | 150ng | 1.35μg |
| 100ng | 350ng | 1.65μg |
| 300ng | 750ng | 2.2μg |
| 1μg | 1.3μg | 2.6μg |
| 3μg | 1.6μng | 2.6μg |
6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应,立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链,然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测,标记产物将是弥散状态。
注意:本方法标记核苷酸掺入率极高,因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化,注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针,因为这些标记分子疏水性强,能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失,但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针,由于其极其不稳定,因此应该立即使用,不要长久放置。
λDNA北京现货促销关键词:BTN90407A,Lambda DNA,λDNA
SV1418 pMAL-p5X 载体
SV0061 AscI RE-Mix限制性内切酶 AscI RE-Mix Restriction Endonuclease
KFS302 SP600125 (JNK抑制剂)
SY0543 支原体去除试剂1(100X) Antibiotic Solution 1(100X)
YT921 Bcl-2抑制剂(ABT-737) Bcl-2 Inhibitor
BTN131125 辣根过氧化物酶(偶联级) Horseradish Peroxidase,Conjugation Grade
HR0503 细菌活性检测试剂盒-CCK8 Bacterial activity assay kit -CCK8
SY0180 ER-GFP报告基因质粒 Estrogen Receptor (ER) GFP Reporter Plasmid
YT265 生物素标记YY1凝胶迁移探针(0.2μM) Biotin-labeled YY1 Probe For EMSA
BTN80806 大肠杆菌TOP10化学感受态细胞 E.coli TOP10 Chemical Competent Cell
ALH178 唾液DNA收集提取试剂盒 Saliva DNA collection, preservation,transport and extraction Kit
YT510 Klenow片段(无外切酶活性) Klenow Fragment,Exo-
WE0254 BL21(DE3)pLysS感受态细胞 BL21(DE3)pLysS Competent Cell
BTN60805 中草药DNA提取试剂盒 Chinese herbal medicine DNA extraction kit
SV1166 T4 噬菌体基因 32 编码蛋白 T4 phage gene 32 encoding protein
RFT155 PAGE预制胶(8-16%)
KFS199 Caspase 3荧光法检测试剂盒(AFC) Caspase-3 Fluorescence Metric Assay
SY0438 人源乙酰化低密度脂蛋白 Human Acetylated Low Density Lipoprotein(Human Ac-LDL)
λDNA北京现货促销关键词:BTN90407A,Lambda DNA,λDNA
·植物DNA提取试剂盒(百万碱基级)
编号:BTN130939
英文名称:Plant DNA extraction kit(millions of base)
规格:10次
·重组蛋白G
编号:BTN131080
英文名称:Streptococci protein G
规格:1mg
本品为重组蛋白G,纯度>90%,带His标签,分子量10kD。
储存条件:-20℃保存,有效期1年。
·酿酒酵母EGY48化学感受态细胞
编号:BTN140387
英文名称:E.coli EGY48 Chemical Competent Cell
规格:10×100μL
EGY48感受态细胞是实验室常用酵母双杂用菌株,MATα型,可转化质粒或mating 操作。Transformation marker为his3,trp1,ura3 ,报告基因为LEU2 。本产品经PGBKT7质粒检测转化效率为104cfu/μg DNA。
基因型:MAT α,ura3,his3,trp1,Lex Aop(x6)-LEU2
储存条件:干冰运输,-80℃保存,有效期6个月。
·革兰氏阳性菌质粒DNA提取试剂盒
编号:BTN120601
英文名称:Gram-positive bacteria plasmid DNA extraction kit
规格:50次
EGY48感受态细胞是实验室常用酵母双杂用菌株,MATα型,可转化质粒或mating 操作。Transformation marker为his3,trp1,ura3 ,报告基因为LEU2 。本产品经PGBKT7质粒检测转化效率为104cfu/μg DNA。
基因型:MAT α,ura3,his3,trp1,Lex Aop(x6)-LEU2
储存条件:干冰运输,-80℃保存,有效期6个月。
·大肠杆菌BL21化学感受态细胞
编号:BTN140428
英文名称:E.coli BL21 Chemical Competent Cell
规格:0.1mL*10
本产品是采用大肠杆菌BL21菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。本产品用作表达载体的宿主,适用于毒性蛋白的表达,适用于不是基于T7启动子的表达系统。使用pUC19质粒检测,本产品转化效率可达107。
菌株基因型为:BL21 strain E.coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-)gal。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的。
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