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pmiR-RB-Report™报告基因质粒载体转录后可形成萤火虫荧光素酶与靶基因3’UTR区域组合而成的特殊mRNA，如果miRNA mimic能够与包含靶基因3’UTR的mRNA互补结合，则荧光素酶的表达活性也收到显著调控，故通过检测荧光素酶的荧光强度即可定量分析miRNA对靶基因的mRNA调控效果。
由于pmiR-RB-Report™报告基因的3’UTR长度不一，大多数长度为1～2.5kb之间。一般建议构建长度不超过2.5kb，同时建议构建单位点突变载体。将pmiR-RB-Report™ h-AKT1报告基因质粒载体(1ug)及hsa-miR-146a mimic (50nM)共转A549细胞系， 采用双荧光素酶检测试剂盒检测结果表明hsa-miR-146a对AKT1 3’UTR有显著调控作用。将pmiR-RB-Report™ h-BCL2报告基因质粒载体(1ug)及hsa-miR-9 mimic (50nM)共转A549细胞系，采用双荧光素酶检测试剂盒检测结果表明hsa-miR-9对BCL2 3’UTR有较明显调控作用。
客户提供：
需要验证的miRNA和靶基因
我们提供：
1）miRNA生物信息学分析
2）靶基因3’-UTR双荧光素酶野生型载体构建：
3）靶基因3’-UTR双荧光素酶突变型载体构建
4）miRNA 与双荧光素酶载体共转染及检测
5) 提供详细的检测结果和实验报告
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文献和实验一、miRNA的靶基因寻找研究表明，一个基因可以受多个miRNA调控，而一种miRNA又可以参与调控多个靶基因，据预测，至少有30%的人类基因是miRNA的靶基因。这就足以显示出miRNA群体的重要性。而在人类疾病中多不同程度的表现出大量miRNA的上调和下调，这也足以显示miRNA在疾病发生过程中占据着非常重要的作用。而探讨miRNA的功能作用中最重要的一步就是高效准确的寻找到其所调控的靶基因。目前寻找靶基因主要是从以下两个方面入手。1．生物信息学方法miRNA靶基因的预测主要是根据生物
人员往往会使用很多microRNA分子来沉默细胞中大量的mRNA表达，有时候这些被沉默基因的数目甚至比所使用的microRNA数目还要多。而现在使用的计算机预测靶基因技术还不够成熟，非常容易出错。鉴于此，去年人们开始使用一种新型的大规模验证方法，即在硅片上进行microRNA靶基因验证的“湿试验（真正的试验而不是用计算机模拟的“干”试验）”。 由于采用了这种方法，研究人员在2008年取得了一系列的成果。Nikolaus Rajewsky小组和David Bartel小组都各自独立地将蛋白
biophysics hsa-miR-3155 is not in our miRNA database. targetscan 5.1 新收录的在哪个库可以预测靶基因？ freecell 网上预测工具很多，你只有逐个去验证了。 http://www.exiqon.com/microrna-target-prediction http://www.ncrna.org
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