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- 2025年07月15日
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上海经科化学科技有限公司
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质粒扩增服务
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质粒扩增服务
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文献和实验douermm 最近需要扩增质粒，RNAi用的。接大肠杆菌种用的LB培养基，看有的文章上写的配成PH=7.0的，有的写配成PH=7.5的，到底应该配成多少呢？还有，用买的比如麦康凯培养基，会不会比自己配的效果好？谢谢~！ slytjiaofei ph7或7.5对大肠杆菌生长基本没有任何影响。 douermm 谢谢楼上~ 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿
为 10–15bp，同时合成反向互补的引物。(2) 设计引物时最好将突变引物设在目的基因的中央位置。(3) 设计引物时需要注意 GC 含量应大于 40%，Tm 值至少达到 78℃。2．突变质粒的扩增：突变质粒的扩增过程中，需要选用高保真酶 Pfu 酶进行质粒扩增, 防止引进新的突变。通过 PCR 过程，突变型质粒也得到了扩增。3. 得到 PCR 产物后，将产物立即置于冰上，然后在 PCR 反应体系中加入 1 微升 Dpn I，混匀后 37℃孵育 1-2 小时。DpnI 能够识别甲基化位点并将其酶切
为 10–15bp，同时合成反向互补的引物。(2) 设计引物时最好将突变引物设在目的基因的中央位置。(3) 设计引物时需要注意 GC 含量应大于 40%，Tm 值至少达到 78℃。2．突变质粒的扩增：突变质粒的扩增过程中，需要选用高保真酶 Pfu 酶进行质粒扩增, 防止引进新的突变。通过 PCR 过程，突变型质粒也得到了扩增。3. 得到 PCR 产物后，将产物立即置于冰上，然后在 PCR 反应体系中加入 1 微升 Dpn I，混匀后 37℃孵育 1-2 小时。DpnI 能够识别甲基化位点并将其酶切
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