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- 2025年07月11日
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上海经科化学科技有限公司
- 服务名称：
原位杂交实验
- 规格：
张
原位杂交（单标）实验服务
原位杂交（双标）实验服务
原位杂交（三标）实验服务
原位杂交白光实验服务
原位杂交实验
项目介绍：
1. 原位杂交原理：原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。
2. 所需器材：
恒温箱，高压灭菌锅，移液枪，钟摆摇床。
3. 主要试剂：DEPC。原位杂交固定液。PBS缓冲液。20×SSC洗脱液。蛋白酶K。苏木素染液。中性树胶。杂交液。HRP二抗。DAB显色剂。
2.实验步骤：
石蜡切片DAB显色原位杂交实验步骤
1、组织固定：组织取出洗净后立即放入固定液（DEPC水配制）中固定2-12h。
2、脱水：组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡，包埋。
3、切片：石蜡经切片机切片，摊片机捞片，62°烤箱烤片2h。
4、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。
5、消化：根据组织固定时间长短，切片于修复液中煮沸10-15分钟，自然冷却。后基因笔画圈，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化 min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。
6、阻断内源性过氧化物酶：滴加3%甲醇-H2O2，室温避光孵育15min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
7、预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1h。
8、杂交：倾去预杂交液，滴加含探针 杂交液, 浓度 ，恒温箱 度杂交过夜。
9、杂交后洗涤：洗去杂交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室温洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加甲酰胺洗涤。
10、滴加封闭液：滴加封闭血清 BSA 。室温30min。
11、滴加鼠抗地搞辛标记过氧化物酶（anti-DIG-HRP）：倾去封闭液，滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育40min，后PBS洗4次×5min。
12、DAB显色：切片稍甩干后，在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，纯水冲洗切片终止显色。
13：复染细胞核：Harris苏木素复染3min左右，自来水洗，1%盐酸酒精分化数秒，自来水洗，氨水返蓝，流水冲洗。
14：脱水封片：将切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min—100%酒精I 6min—100%酒精II 6min-正丁醇6min—二甲苯透明，将切片从二甲苯中拿出稍晾干后，中性树胶封片。
15、显微镜检，图像采集分析。
结果判读：阳性为棕黄色，细胞核为蓝色。
1. 注意事项：mRNA为检测对象时，需严格要求实验环境经无RNA酶处理。
分子病理实验服务
IF/免疫荧光检测-IHC/免疫组化检测-Tunel检测-ISH/原位杂交检测-Confocal/共聚焦：
本公司还提供以下实验方面服务
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文献和实验一质粒制备 1质粒的转化和扩增 1.1制备XL1-Blue感受态细菌 1．取400uLXL1-Blue菌种加入到含200mlLB培养基的锥形瓶中，37℃、100rpm培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1mol／LCaCl_2重悬细菌，冰浴30min，离心，弃上清，倒置，再加4ml(含15％甘油)冰冷的CaCl2重悬细菌，分装(200μ／tube)，-80℃保存。 2．转化
原位杂交组织（或细胞）化学 （In situ Hybridization Histochemistry，ISHH） 简称原位杂交（In Situ Hybridization），属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同，原位杂交可分为DNA-DNA杂交，DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交三类。 根据探针的标记物是否直接被检测，原位杂交又可分为直接法和间接法两类。直接法主要用放射性同位素、荧光及某些酶标
1. 实验目的 通过实验了解荧光原位杂交技术的基本原理和在生物学、医学领域的应用。掌握原位杂交技术的操作方法，熟练掌握荧光显微镜的使用方法。 2. 实验原理 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛
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