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- 免疫荧光芯片-单标/双标
- 上海
- 2025年07月15日
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上海经科化学科技有限公司
- 服务名称：
免疫荧光芯片-单标/双标
- 规格：
张
免疫荧光（双标）实验服务
免疫荧光（单标，芯片）实验服务
免疫荧光（双标，芯片）实验服务
免疫荧光芯片-单标/双标
一、实验器材及试剂
1、 实验器材
2、 主要实验试剂
二、 石蜡切片免疫荧光实验步骤
1、 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。
2、 抗原修复：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液（PH9.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火至沸后断电间隔10min中低火至沸，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定）
3、 加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）
4、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织，避光室温孵育50min。
5、 DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
6、 封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
7、 镜检拍照：切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。
分子病理实验服务-（免疫荧光芯片-单标/双标）
IF/免疫荧光检测-IHC/免疫组化检测-Tunel检测-ISH/原位杂交检测-Confocal/共聚焦：
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本公司还提供以下实验方面服务
“病理学”、“分子生物学”、“细胞生物学”、“图像分析”
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文献和实验免疫荧光单标记和双标记的方法 1免疫荧光单标记方法 免疫 荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子，方法比较简单，只要按照染色步骤去做，通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择，固定液选择的合适与否，可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。 1)所需材料与试剂 (1)培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60％一70％的细胞。 (2)一抗、FITC或TRITC标记的二抗。 (3)4％多聚甲醛固定液或冷
对照。 二、注意事项 1、荧光染色后一般在 1h 内完成观察，或于 4℃ 保存 4h ，时间过长，可能会使荧光提前衰退。 2、每次试验均需设置以下三种对照： （1） 阳性对照：阳性血清+荧光标记物； （2）阴性对照：阴性血清+荧光标记物； （3）荧光标记物对照：PBS +荧光标记物。 三、免疫荧光双标的经验之谈 1、选取一抗时，要求来源于两种不同的动物，我用的是来源于家兔和大鼠的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是 donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti
）可提高敏感性。最后，通过确定由多个操作人员和/或使用不同抗体批次进行的研究是否提供可比较的结果来确定可重复性[1]。 2. 多重荧光免疫组化检测方法的开发和优化 a 首先使用单标免疫组化和免疫荧光优化 首先开发单标测定，以初步了解染色参数，包括组织处理/固定参数、抗原检索条件（ pH 值和温度）、基于已知阳性对照的亚细胞定位和染色模式、抗体和检测试剂滴定以及其他孵育和封闭条件。单标免疫组化是此步骤的首选起始方法，除非用户以前具有免疫荧光（IF）的经验[2]。 建立 IHC
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