HRP-SPA辣根过氧化物酶-葡萄球菌A蛋白偶联物

辣根过氧化物酶（HRP）

HRP是一种分子量达44 000的糖蛋白，由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成，中性糖和氨基糖约占18％，主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每一个HRP分子中含一个氯化血红素IX作辅基，该辅基在403nm波长处有最大吸收峰，而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有最大吸收。HRP在403nm的OD值与275nm的OD值之比，也就是所谓的RZ(Reinheits Zahl)值。RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量，并非表示HRP制剂的真正纯度，而且RZ值高的HRP制剂，并不意味着酶活性也高

HRP (辣根过氧化物酶) 标记抗体流程

1.         8 mg 辣根过氧化物酶放入1 ml玻璃瓶，加入1 ml双蒸水溶解，液体呈棕色。 2.         放入一个磁力搅拌子，电磁搅拌同时逐滴缓缓加入新配制的 NaIO4 0.2 ml，室温下继续搅拌40 min，液体呈现草绿色。 3.         将全部溶液用滴管装入反复用去离子水冲洗的透析袋中，4 oC 对1  mM pH 4.4的NaAc透析过夜，中间换液3－4次，每次300 ml，溶液最终呈浅棕色。 4.        

SPA夹心ELISA实验检测CIC

钠法将SPA与辣根过氧化物酶（HRP）制成结合物，最适工作浓度以方阵法滴定；（4）热聚合人IgG：人IgG 10mg/ml，63℃加热20min制成。2、操作步骤（1）用PBS稀释SPA成5Ps/ml，包被聚苯乙烯反应板微孔，每孔0.1ml（对照孔不包被），置4℃过夜后洗涤3次备用；（2）待测血清0.05ml加PBS0.15ml和5%PEG0.2ml混匀，4℃过夜后1600r/min离心20min，弃上清，沉淀用2.5%PEG洗2次，加入PBS0.2ml和BSA缓冲液0.2ml，混匀，置37℃水浴