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- 文献和实验
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3192
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连桥生物
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现货
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见说明
- 规格:
见说明
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文献和实验医大太阳公司产品;低温高速离心机:上海离心机械研究所.(三)IL-2质粒DNA探针的大量制备1、含IL-2质粒DNA探针的提取取含IL-2质粒DNA的单个菌落置两个25ml LB培养基(含100μg/ml Amp)↓37℃ 220r/min 振摇过夜(约16h)取10ml菌液加200ml LB培养液(含100μg/ml Amp)↓37℃ 150r/min 振摇4h加氯霉素(终浓度170μg/ml)↓37℃ 220r/min 振摇3h菌液倒入300ml离心管中离心↓4℃ 5000r/min×10min
分钟,然后4℃下12000g 离心10 分钟。 8、弃上清,将管口敞开倒置于卫生纸上使所有液体流出,加入1ml 70%乙醇洗沉淀一次,4℃下12000g 离心5-10 分钟。 9、吸除上清液,将管倒置于卫生纸上使液体流尽,真空干燥10 分钟或室温干燥。 10、将沉淀溶于20μl TE 缓冲液(pH8.0,含20μg /ml RNaseA)中,储于-20℃冰箱中。 [注意] 1. 提取过程应尽量保持低温。 2. 提取质粒DNA 过程中除去蛋白很重要,采用酚/氯仿去除蛋白效果
7、 弃上清,悬浮DNA沉淀于2ml TE缓冲液中。这一步中也许有的沉淀不能溶解。 8、 加10ml Wizard大量DNA纯化树脂溶液, 并涡旋混合。 9、每一个样品,使用一支Wizard大量柱子,柱子的头插在真空器上(Promega产品,与此配套)。 10、将树脂/DNA混合液转入柱子中,真空抽取树脂/DNA混合液。 11、将树脂/DNA混合液抽干后,加13ml柱子洗脱溶液至离心管中, 对管底部的树脂/DNA进行洗脱(柱子一边旋转一边加入洗脱液),并加入柱子中。 12
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