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- 文献和实验
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3432
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连桥生物
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现货
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文献和实验小鼠肿瘤样本制备 颈椎脱臼法将荷瘤小鼠处死,75% 酒精浸泡 5 min,取出小鼠置于无菌操作台上。 左手持镊子,右手持弯剪,沿肿瘤边缘剪下长约 1cm 的口子,可清晰看见肿瘤附着于皮下,沿肿瘤边缘轻轻剪开连接处,剥离肿瘤。 将剥离的肿瘤放入100 mm 的培养皿中,并在室温下加入 5~10 mL 的 1640 基础培养基。 单细胞悬液的制备 A.混合酶消化法 待所有肿瘤剥离完毕后,将肿瘤转移至 1.5 mL EP 管中,手持弯剪将肿瘤充分剪碎,边剪边加入1640基础培养基,静置数秒
,5%CO2 的培养箱中培养至细胞汇合度 70-80% 时进行传代。 3、吸去 MEFs 培养基,将 iPSCs 接种于明胶上,添加 10ml iPSCs(I)培养基,放置在 37℃,5%CO2 的培养箱中培养 3-5 天。 定向内胚层分化 4、在 60mm 培养皿中加入 2ml Matrigel,室温静置 2h 并添加 DMEM-F12 培养基至完全没过 Matrigel。 5、用不含 Ca2+/Mg2+ 的 PBS 冲洗 iPSCs 后,加入 300μl Accutase,37℃ 孵育
细胞培养技术中,细胞计数是一项基本功,对于标准化培养条件以及需要精确定量的实验来说都非常关键。这里介绍使用血细胞计数器对细胞进行计数的经典方法以及中间一些需要注意的细节。制备细胞悬液:对于贴壁生长的细胞,我们需要首先使用胰酶消化的方法使细胞从培养皿表面脱落根据需要加入合适体积的培养基,将细胞进行中和及稀释,以得到均质的细胞悬液。要求尽可能将细胞吹打散开,不要残留任何细胞团准备血细胞计数器:使用70%乙醇将盖玻片和血细胞计数器清洁干净将将盖玻片润湿(使用水或呼一口气,目的是使盖玻片与血细胞
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