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一年
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北京百奥莱博科技有限公司
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4℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博供应的浓缩型免疫组化试剂盒(SABC-POD)(兔IgG)厂家直销用于科研目的生化试验项目,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多浓缩型免疫组化试剂盒(SABC-POD)(兔IgG)等免疫检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:浓缩型免疫组化试剂盒(SABC-POD)(兔IgG)厂家直销
规格:1盒
编号:ZN1839
品牌:百奥莱博
适于一抗为兔来源抗体
产品规格:1KIT
保存条件:4℃可保存一年,应避免冷冻。
工作原理:
SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍,等电点 pI=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低。根据研究,SABC 大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶可以保证 SABC 具有很高的敏感性。所以 SABC 兼具高敏感性,低背景和操作简便的优点。SABC不仅有很强的信号放大作用,而且非常稳定。
试剂盒内容:
1.山羊血清封闭液(效价 1:10)2.5ml/5ml/10ml
2.生物素标记山羊抗兔 IgG(效价 1:100)0.25ml/0.5ml/1ml
3.SABC(效价 1:100)0.25ml/0.5ml/1ml
另有三个滴瓶供稀释试剂用。稀释液可选用 TBS 或 PBS 缓冲液
石蜡片染色步骤:
1.石蜡切片,常规脱蜡至水。
2.3%H2O2 去离子水室温孵育5-10分钟,以消除内源性过氧化物酶活性。PBS冲洗,5分钟×3次。
3.根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
4.封闭。滴加山羊血清封闭液(效价 1:10),37℃孵育30分钟,甩干,勿洗。
5.滴加一抗(兔 IgG),37℃孵育1-2 小时或 4℃过夜。PBS 冲洗,5分钟×3次。
6.滴加生物素标记山羊抗兔 IgG(效价 1:100),37℃孵育30分钟。PBS 冲洗,5分钟×3次。
7.滴加 SABC(效价 1:100),37℃孵育30分钟。PBS 冲洗,5分钟×3次。
8.显色液显色,镜下控制反应时间。显色剂可选 DAB或AEC。自来水充分冲洗。
9.根据需要进行苏木素复染,染色时间为0.5-2分钟。脱水,透明。
10.选用中性树胶,水溶性封片剂或其他适当的封片剂封片。
建议:
1.对于 AP(碱性磷酸酶)显色系统,请用不含磷酸根的缓冲液洗涤,如 TBS 缓冲液。
2.热修复可选用枸橼酸盐缓冲液、EDTA 抗原修复液、PBS 缓冲液、TBS 缓冲液等作为抗原修复液。
3.酶修复可选用复合修复液、抗原修复液Ⅰ(与热修复配合使用)、胰蛋白酶、胃蛋白酶消化组织。
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文献和实验两者所用的显色系统也不同。SP法与SAP法的其他染色步骤同SABC法。 Envision TM SVStemS 该法是近几年在国内推广使用的一种方法,它的原理是将多个抗鼠和抗兔IgG分子与辣根过氧化物酶结合形成聚合物。以代替传统方法的二抗和三抗,直接与特异性第一抗体结合,从而放大了抗原抗体结合的信号,使检测变得简单而且敏感性增加。经DAB显色即可完成染色,其他染色步骤与SABC法相同。 Envision TM SVStemS原理示意图
说明:这是我今年做免疫组化的一点体会,奉献给大家。如有不正确的地方,敬请指教。同时,这也是我应付《免疫组化》的一份作业,老师给了我85分。斑竹呀,如果觉得有点用,就请鼓励一下,加点分吧!:D:D:D应用SABC法进行免疫组化染色的体会SABC(Strept Actividin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法。由于该方法中的链霉亲和素的等电点接近中性(pH=6.0-6.5),对组织和细胞的吸附性特别低,因而具有较低的背景。它的步骤
FITC标记的B抗体染色,根据两种抗体的动物种属不同,可用直接法也可用间接法,结果A抗原呈现橘红色荧光,而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中,常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如,在实验设计时,选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗,相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时,由于两种一抗种属来源不同,可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗,滴加二抗时,先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育,洗涤后,滴加SABC-Cy
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