北京现货浓缩型免疫组化试剂盒(SABC-Cy3)(兔IgG)

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名称：北京现货浓缩型免疫组化试剂盒(SABC-Cy3)(兔IgG)特价优惠
规格：1盒
编号：ZN1857
产地：国产|进口
产品规格：1KIT
保存条件：4℃可保存一年，应避免冷冻
工作原理:
SABC 是专为免疫化学而设计的，用以显示组织或细胞中的抗原分布。SABC-Cy3 代表了新一代的免疫荧光方法。Cy3 比传统上的荧光更具有亲水性，因而不会因疏水性而引起非特异性吸附或聚合，从而背景更低。而且其敏感性和稳定性都更好。Cy3 在 554nm 激化，在568-574nm 发射荧光，呈鲜红色。
试剂盒内容：
1．正常浓缩山羊血清(稀释比 1:10)1ml/2ml/5ml
2．生物素标记羊抗兔 IgG(参考效价 1：100)0.1ml/0.2ml/0.5ml
3．SABC- Cy3(参考效价 1：100)0.1ml/0.2ml/0.5ml
4．另有三个滴瓶可供稀释试剂用
石蜡片染色步骤：
1．切片脱蜡至水。
2．根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
3．封闭：滴加稀释的正常山羊血清封闭液(稀释比 1:10),室温 20分钟。甩干，勿洗。
4．滴加适当稀释的一抗(兔 IgG)，37℃孵育1~2 小时或 4℃过夜。PBS洗5分钟×3次。
5．滴加稀释的生物素标记羊抗兔 IgG(参考效价 1:100),37℃孵育30分钟。PBS洗5分钟×3次。
6．滴加稀释的SABC- Cy3(参考效价1:100-)，37℃孵育30分钟。PBS洗5分钟×4次。
7．水溶性封片剂或抗荧光衰减封片剂封片。
荧光显微镜观察建议：
1．热修复可选用枸橼酸盐缓冲液、EDTA 抗原修复液、PBS 缓冲液、TBS 缓冲液等作为抗原修复液。
2．酶修复可选用复合修复液、抗原修复液Ⅰ、胰蛋白酶、胃蛋白酶消化组织。

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·小鼠Galectin-1重组蛋白
编号：ZN1760
规格：100ng
来源：大肠杆菌
特异性：小鼠
应用：WB 阳性对照
形态：冻干粉
纯度：>98%，RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件：-20℃保存 1 年以上，避免反复冻融。

·RPA1 mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN1233
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.RPA1 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
RPA1的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。


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丙*(代"酮")酸*溶液(0.1mol/L,无菌)   100ml
NF-266 APOA-1,APOB标准血清
ARB13489 鸡热休克蛋白60(Hsp-60)elisa检测 Chicken heat shock protein 60,hsp-60 ELISA KIT
柠檬酸—柠檬酸*缓冲液(0.1mol/L,pH4.5)   500ml
B0401 标准新生牛血清(辐照灭菌)
ARB13604 兔子转化生长因子β1(TGF-β1)Elisa方法检测 Rabbit transforming growth factor β1,tgf-β1 ELISA KIT
PY02-367  紫红胆盐葡萄糖琼脂(USP、EP)  250克  
ARB10949 人谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)代做ELISA实验 Human glutathione peroxidase,gsh-px ELISA KIT
ARB13715 兔胎盘生长因子(PLGF)含量检测 Rabbit  placenta growth factor,plgf ELISA KIT
N-癸酰基-N-甲基葡糖胺 Pyridine hydrochloride 85261-20-7
糖原D-PAS染色液(淀粉酶消化法)   5×50ml|5×100ml
羟甲基纤维素 VB3
BL0847 羊抗BSA纯化抗体
ARB10494 人白介素8(IL-8)ELISA代测服务 Human interleukin 8,IL-8 ELISA KIT

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