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481
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一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
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室温
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括北京伊红染色液促销在内的一系列细胞生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:北京伊红染色液促销
编号:ZN1973
品牌:百奥莱博
规格:10ml
保存条件:室温保存,至少一年有效。
产品简介:
HE染色试剂盒操作简单,只需将染色液滴加在样本上即可染色,并且染色液经过改良处理,不含汞,甲醇等有毒试剂。苏木素为碱性染液 ,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ;伊红为酸性染料 ,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着粉红色或者红色 。HE 染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
北京伊红染色液促销正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·TSARG7 mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN1447
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:mouse
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.TSARG7 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
TSARG7的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
北京伊红染色液促销关键词:百奥莱博,ZN1973,伊红染色液
PY02-059 EC肉汤 250克
73049-39-5 小牛胸腺DNA DNA(calf thymus)
9001-12-1 胶原酶Ⅳ CollagenaseⅣ
F030832 BIOTIN标记小鼠抗猪IgG抗体 Monoclonal Mouse Anti-Pig IgG*BIOTIN
BTN3191 Tris饱和酚 Tris-Saturated Phenol
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3483-12-3 二硫苏糖醇 DTT
ARB10341 人水痘带状疱疹病毒IgG(VZV-IgG)ELISA代测服务 Human varicella zoster virus igg,vzv-igG ELISA KIT
SJ0647 AMV Reverse Transcriptase 反转录酶
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北京伊红染色液促销关键词:百奥莱博,ZN1973,伊红染色液
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碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液(10×) 500ml
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改良Barth溶液(含*) 500ml
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H0601 马血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
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醋酸白试剂 100ml
ARB10917 人抗磷脂酰丝*酸抗体(APSA)elisa检测操作说明书 Human anti-phosphatidyl serine antibody,apsa ELISA KIT
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聚腺苷酸 α-D-Lactose monohydrate
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*化乙酰胆碱 L-Histidine methyl ester dihydrochloride 60-31-1
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文献和实验【求助】克隆100个已知序列的基因于带有绿色荧光蛋白的载体中需要多少时间和经费?
个和12,000个,其中11,000个克隆的表达已经通过Western Blot的验证。这些克隆以2种形式提供:一种是在表达的蛋白C末端带Myc-DDK(即FLAG)标签,一种是带GFP标签。这些cDNA克隆均构建于pCMV6入门载体上,可方便转换至其他目的载体。 按照其网页上的促销价:900RMB/clone × 100 = 9万RMB, 直接买,不用等时间,就可搞定,批量买估计还可以讲价,关键的是品质有保证。 注:非公司托儿,因前段时间帮朋友筹划项目专门研究
(1) 甲醛液中固定时间过长. (2) 切片过厚. (3) 组织固定不佳. (4) 苏木精和伊红染色分化不良. 2.处理方法 (1) 固定液甲醛易氧化成甲酸,使细胞核在酸性液体的作用下不易着色,而细胞浆酸性增加后伊红染色加深,所以在备用的甲醛溶液中加入少量的碳酸镁或碳酸钠来做中和剂,以防止染色不良 (2) 切片厚度控制在3~5&mu
至010-80485460或E-mail至 liuyu@genomics.cn。010-80485460或E-mail至liuyu@genomics.cn。培训费用:全程培训(讲座+实验): 3500元/人,学生为 2900元/人。 注:学生报到请带学生证培训费用包含会务费、资料费、餐费。培训期间公司协助安排住宿,费用自理。 三、相关促销政策 参加本届培训班的学员可以享受公司提供的常规技术服务八折优惠。优惠有效时间2013.10.17-2013.12.31 四、汇款信息 账号
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