Semaphorin 3A/Sema3A mRNA原位杂交试

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

Semaphorin 3A/Sema3A mRNA原位杂交试剂盒北京价格的品牌：百奥莱博，是优质的基因结构和功能产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多Semaphorin 3A/Sema3A mRNA原位杂交试剂盒等基因结构和功能产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：Semaphorin 3A/Sema3A mRNA原位杂交试剂盒北京价格
品牌：百奥莱博
编号：ZN1262
产地：国产|进口
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Semaphorin 3A/Sema3A mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Semaphorin的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

欲咨询购买Semaphorin 3A/Sema3A mRNA原位杂交试剂盒北京价格，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：
BL1134 TOP10受体菌
SJ0132 羧甲基纤维素 CM-52  
REE12 羊血清白蛋白 100g
碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液(10×)   500ml
靛蓝胭脂红 Pyruvic acid 860-22-0
BL1042 胰蛋白胨大豆琼脂TSA
乙二*(代"胺")四乙酸二**盐 Coumarin 23411-34-9
PY01-119  鸟嘌呤  5克  
F030409 胶体金标记山羊抗小鼠IgG3抗体 Goat Anti-Mouse IgG3*GOLD
56-45-1 L-Serine  L-丝*酸
23491-52-3 Bis Benzlimide Hoechst NO33342 荧光染料
ARB10917 人抗磷脂酰丝*酸抗体(APSA)elisa检测操作说明书 Human anti-phosphatidyl serine antibody,apsa ELISA KIT
硫*(代"酸")银 2-Mercaptopyridine N-oxide sodiu*(代"m") salt 10294-26-5
ARB13668 兔白细胞介素1β(IL-1β)定量分析 Rabbit  interleukin 1β,IL-1βELISA KIT
BTN60608 固相内毒素清除剂 Surface Endotoxin Erasol
PBS-BSA溶液(含**,1%BSA)   500ml
SJ0193 Dextran T-2000 葡聚糖T-2000
ARB12281 大鼠抑制素B(INH-B)检测服务 Rat inhibin b,inh-b ELISA KIT
PY02-276  营养琼脂  250克  
ARB11560 人流感病毒A(FLU A)酶免分析 Human influenza viruses a,flu a ELISA KIT
BTN130675 核糖核酸酶HII RNase HII
Semaphorin 3A/Sema3A mRNA原位杂交试剂盒北京价格关键词：ZN1262,Semaphorin 3A/Sema3A mRNA原位杂交试剂盒,百奥莱博

SJ0764 大豆蛋白胨
六偏磷酸* 2′-dU 10124-56-8
BL0808 HRP标记羊抗人IgM抗体
BTN80816 超敏型BCA法蛋白定量试剂盒 Micro BCA Protein Assay Kit
HC0080 PCR管(平盖)
F020206 山羊抗小鼠IgM抗体 Goat Anti-Mouse IgM
ARB11790 人酸性磷酸酶(ACP)ELISA检测服务 Human acid phosphatase,acp ELISA KIT
PY08-056  XLD琼脂平板 9CM  10皿/盒，用于沙门氏菌的选择性分离培养
NF-258 冻干抗人Alb血清
ARB13523 鱼磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)Elisa定量检测 Fish ampk ELISA KIT
BL1198 结晶紫染色液(1%)
N-乙酰-L-酪*酸 HCTU 537-55-3
PC3901 2 x Real Time PCR Mix (Probe荧光探针法定量PCR)
HC0333 8道道雷勃彩色移液器(全彩)
ARB10811 人抗百日咳病毒(PT-Ab)检测服务 Human anti-pertussiu toxin,pt-ab ELISA KIT
ARB11957 大鼠Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)elisa检测说明书 Rat collagen type Ⅲ,col Ⅲ ELISA KIT
HC0169 载玻片
Tris-HCl缓冲液(pH8.8)  1mol/L 100ml|500ml
ARB13863 猪生长激素(GH)elisa检测操作说明书 Porcine growth hormone,gh ELISA KIT
ARB12335 大鼠卵巢癌标志物CA125Elisa定量检测 Rat ovarian cancer marker-ca125 ELISA KIT
Semaphorin 3A/Sema3A mRNA原位杂交试剂盒北京价格关键词：ZN1262,Semaphorin 3A/Sema3A mRNA原位杂交试剂盒,百奥莱博

牛磺胆酸* Benzimidazole 145-42-6或345909-26-4
铍试剂Ⅰ Lithium citrate 607-96-5
ARB13663 兔去甲肾上腺素(NA)检测服务 Rabbit noradrenaline,na ELISA KIT
BL1075 预染超低分子量蛋白MARKER
F030205 HRP标记山羊抗小鼠IgG抗体 Goat Anti-Mouse IgG*HRP
11081-40-6 葡聚糖凝胶G-15 Sephadex G-15 medium
胆碱酯酶(ChE)检测试剂盒(羟胺*化铁比色法)   50T
罗丹明123 Maltotriose 62669-70-9
ARB11108 人乳头瘤病毒(HPV)Elisa方法检测 Human papillomavirus,hpv ELISA KIT
PY08-072  李氏增菌肉汤2(LB2) 10ml  20支/盒，用于李斯特氏菌的选择性增菌培养
寡聚脱氧胸苷纤维素 VB2
CYB164003 羊抗人C3-HRP
ARB14111 人胃生长素(GhrelIn)含量检测 
6104-58-1 考马斯亮蓝 Coomassie brilliant blue G-250
碱性磷酸酶封闭液(乙酸法)   100ml
偶氮脒类引发剂V59 Amprolium hydrochloride 13472-08-*(代"7")
ARB10819 人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)检测服务 Human polymyositis-sclerosis antibody,pm-scl/pm-1 ELISA KIT
F040107 鸡卵清蛋白偶联沙丁胺醇 OVA-SAL
4-(4-硝基*(代"*")偶氮)-1-*酚 Grape Seed Extract 5290-62-0
BTN130870 硫氧还蛋白 Thioredoxin

我公司正在火爆促销基因结构和功能系列产品，欢迎您的垂询选购Semaphorin 3A/Sema3A mRNA原位杂交试剂盒北京价格。