5′/3′ RACE Kit, 2nd Generation

5′/3′ RACE试剂盒，第2代

sufficient for 10 reactions

一般描述

cDNA末端快速扩增(RACE)是一种用于从部分已知序列快速获得全长cDNA的常用技术。5′/3′ RACE试剂盒包含转录物逆转录酶和重组末端转移酶。转录子逆转录酶可转录全长cDNA，用于高达14 kb的55′或3′ cDNA片段的高灵敏度和快速扩增。其具有热稳定性（高达+ 65°C），适用于具有高二级结构的高GC含量模板。使用转录物逆转录酶可以实现高灵敏度，从而实现高效的cDNA合成和长RACE产物的获得。重组末端转移酶用于将同聚A尾添加至cDNA的3′末端。poly(A)⁺尾可降低oligo(dT)-锚定引物所产生的不适当截短的可能性，并且可以克服相较于G / C来说较弱的A / T杂交问题.此外，在oligo(dT)-锚定引物可以与内部位点进行杂交并且截短扩增产物之前，需要一段更长的A残基片段。使用基因特异性引物和oligo(dT)-锚定引物通过PCR扩增加尾cDNA。使用嵌套的特异性引物和PCR锚定引物，通过第二次PCR进一步扩增所获cDNA，从而将RACE产物克隆到合适的载体中以用于后续研究。

特异性

热灭活：终端转移酶：70°C，10分钟
转录物逆转录酶：85°C，5分钟

应用

第二代5′/3′ RACE试剂盒适用于

• RNA分子的结构和表达研究
• 生成全长cDNA
• 从低拷贝RNA信使中分离和鉴定5′或3′末端
• 第一链cDNA合成
• 扩增和进一步克隆稀有mRNA
• 与外显子捕获方法结合使用
• RACE反应产物无需克隆即可直接测序

特点和优势

• 强大的性能: 重组转录物逆转录酶能够在困难的二级RNA结构区域上向前移动。
• 方便：RNA的5′ 或3′ 末端的功能和表达研究可以用相同的试剂盒进行。
• 可靠： 使用重组末端转移酶获得的dA加尾cDNA降低了不当截短的概率。
• 可重复：具有非3′ dT的寡聚dT-锚定引物能够确保与poly (A)尾的内端正确结合。
• 产生长片段：使用转录物逆转录酶生成长达14kb的cDNA。

对照反应包括使用对照引物neo1/rev将对照RNA转录成第一链cDNA。使用对照引物neo2/rev和neo3/for进行cDNA的扩增，以获得157bp的PCR产物。使用dATP对纯化的cDNA进行加尾。用寡聚dT-锚定引物和对照引物neo2/rev进行加尾cDNA的扩增，以获得293bp的PCR产物。

包装

1个试剂盒包含12个组分