北京现货CBP/P300 mRNA原位杂交试剂盒销售

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北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京现货CBP/P300 mRNA原位杂交试剂盒销*(代"售")在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：北京现货CBP/P300 mRNA原位杂交试剂盒销*(代"售")
规格：100T
品牌：百奥莱博
编号：ZN0216
产地：国产|进口
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.CBP/P300 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
CBP/P300的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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HC0229 加样槽(可高压灭菌)
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BTN130519 巯基磁珠 Magnetic beads,Sulfydryl
BTN131160 异硫*酸荧光素标记山羊抗小鼠IgG Goat Anti-Mouse IgG ,FITC Conjugate
亚磷酸*二*五水合物 Amylopectin 13517-23-2
67-42-5 乙二醇-双-(2-*基乙基)四乙酸 EGTA
ARB12877 小鼠可溶性瘦素受体(sLR)ELISA检测服务 Mouse leptin soluble receptor,slr ELISA KIT
对甲**(代"胺")兰*盐 2-Ethoxynaphthalene 102185-33-1
ARB10725 人异柠檬酸脱*酶(ICD)酶免分析 Human isocitRate dehydrogenase,icd ELISA KIT
QuantScript RT Kit 
2,5-二羟基*甲*(代"酸") Fmoc-D-Ala-OH 490-79-9
001010 猪血清 100ml|500ml
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ARB11846 人凝血酶血栓调节蛋白复合物(T-TM)Elisa分析 Human thrombinthrombomodulin compound,t-tm ELISA KIT
SJ0741 人白细胞分离液
塔格糖 Rnasin Inhibitor 87-81-0
碘化*溶液(NaI,6mol/L)   100ml
北京现货CBP/P300 mRNA原位杂交试剂盒销*(代"售")关键词：ZN0216,百奥莱博,CBP/P300 mRNA原位杂交试剂盒

PIPES溶液(pH7.0)  1mol/L 100ml
PY01-151  纤维素酶(1:1000u/mg)  250克  
BTN131078 天然蛋白A Native Protein A
8042-47-5 Mineral oil 矿物油/石蜡油
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ARB11263 人骨成型蛋白7(BMP-7)Elisa方法检测 Human bone morphogenetic protein 7,bmp-7 ELISA KIT
4,4-氧化偶氮*甲醚 BOC-L-Phenylalanine 1562-94-3
ARB13867 猪白介素10(IL-10)代做ELISA实验 Porcine interleukin 10,IL-10 ELISA KIT
ARB11571 人基质金属蛋白酶4(MMP-4)尿液中含量检测 Human matrix metalloproteinase 4,mmp-4 ELISA KIT
ARB12809 小鼠一氧化*(代"氮")合成酶(NOS)ELISA检测服务 Mouse nitric oxide synthase,nos ELISA KIT
PY02-314  3%*化*碱性蛋白胨水(APW)  250克  
转移核糖核酸(酵母) Z-L-Isoleucine
9068-59-1 中性蛋白酶
DNA Marker(100～2000bp) 
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BTN80801 柱式拭子DNAOUT Column Swab DNAOUT
阿糖尿苷 DL-Arginine 3083-77-0
ARB10663 人血管紧张素Ⅰ转化酶(ACEⅠ)代做ELISA实验 Human angiotensin i converting enzyme,acei ELISA KIT
E0501 抗凝驴血(无菌 pet瓶装)
ARB10034 人I型前胶原C末端肽(CICP)血清中含量检测 Human cross-linked c-teloPeptides of type i collagen,cicp ELISA KIT
十二烷基肌*酸*溶液(10%,RNase free)   100ml
ARB12773 小鼠QA淋巴细胞抗原2(QA-2)elisa测定使用说明书 Mouse qa lymphocyte antigen 2 region,qa-2 ELISA KIT
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J0102 猪抗口蹄疫病毒(FMDV)血清
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Hanks平衡盐溶液(含酚红)  1×HBSS|5×HBSS 500ml
BTN120535 HRP标记的兔抗GST标签多抗 Anti GST-Tag Rabbit PAb,HRP
BFD021 莱克多巴胺快速检测试剂盒
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磷酸*缓冲液(pH6.8)  0.5mol/L 500ml
F040320 大鼠IgG抗原 Rats IgG
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ARB11685 人葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)Elisa定量检测 Human glucose transporter 1,glut1 ELISA KIT

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