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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
960
- 英文名:
BCIP/NBT Kit(40×)
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒(WB IHC)价格厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒(WB IHC)价格厂家
编号:WE0324
英文名:BCIP/NBT Kit(40×)
品牌:百奥莱博
规格:40ml
BCIP是碱性磷酸酶最佳的底物组合之一。在碱性磷酸酶催化下,BCIP会被水解而产生强反应性的产物,该产物与NBT发生反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色化合物。该试剂盒可用于AP系统的IHC 和Western Blot 实验的酶促显色。在AP催化下,在组织切片或印迹膜上结合了AP偶联物的地方产生深蓝色沉淀,可根据颜色反应来确定目的蛋白的位置及表达情况。
试剂盒组成:
| 组份 | 40ml |
| 40×BCIP | 1ml |
| 40×NBT | 1ml |
| BCIP/NBT Buffer | 40ml |
注意事项:
1、工作液应现配现用,配制好的工作液1小时内有效。
2、工作液用量必需充足,保证完全覆盖组织片或印迹膜。
3、为获得最佳实验结果,请务必优化实验条件。
4、NBT有毒,使用时请采取必要的防护措施。
5、本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体治疗。
操作步骤:
1、BCIP/NBT显色工作液配制:根据需要量,将40×BCIP、40×NBT和BCIP/NBT Buffer以1:1:38的体积比混匀后,即为BCIP/NBT显色工作液。
2、显色:
1)印迹膜显色:将配制好的工作液滴加在印迹膜上(或将印迹膜倾入到BCIP/NBT显色工作液中),室温避光孵育3-10分钟。显色完毕后,将膜浸入水中,终止反应。
2)组织切片或细胞爬片显色:滴加适量的BCIP/NBT显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上,室温避光孵育3-10分钟。显微镜下观察控制显色时间,当达到最佳显色效果后,自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明,封片后可长期保存。
储存条件:2~8℃
北京BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒(WB IHC)价格厂家正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·miRNA cDNA第一链合成试剂盒
编号:WE0157
英文名称:miRNA cDNA Synthesis Kit
规格:25次
本试剂盒采用在miRNA 3’末端加多聚A尾的方法来使miRNA具有Poly(A)尾,之后再使用Oligo(dT)-Universal tag通用逆转录引物进行逆转录反应,最终合成miRNA对应的第一链cDNA。
miRNA cDNA第一链合成试剂盒包含miRNA 3’末端Poly(A)尾修饰过程及修饰后逆转录过程需要的全部试剂。该试剂盒具有非常高的Poly(A)修饰和逆转录效率,可以从1ng-2μg的total RNA中有效获得miRNA对应的cDNA第一链。并且操作简便、快捷,可以用于从一个反应合成的cDNA中同时检测多种miRNA,不仅减少了误差、节约了样品,同时还实现了检测的高通量。
试剂盒组成:
| 组份 | 25次 |
| Tris-Hcl,1 mM,PH 8.0 | 1ml |
| E.coli Poly(A)Polymerase,5U/μl | 15μl |
| 10×Poly(A)Polymerase Buffer | 80μl |
| ATP,10 mM | 15μl |
| RT Primer,25μM | 90μl |
| 5×UltraRT Buffer | 120μl |
| UltraPure dNTP Mix,10 mM each | 30μl |
| UltraRT | 15μl |
| RNase-Free Water | 1ml |
备注:本试剂盒须与miRNA荧光定量检测试剂盒(WE0158)配套使用。
自备实验材料:1ng-2μg的总 RNA,或0.1ng-1μg的小分子RNA。
注意事项:
预防RNase污染,应注意以下几方面:
1、使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2、玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3、配制溶液应使用无RNase的水。
4、操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
使用方法:
A.miRNA加Poly(A)尾的过程:
1、首先根据所用RNA的量,按如下公式,用1 mM Tris(PH8.0)来稀释10 mM ATP:
ATP稀释系数=5000/__ng的总RNA
例:如果总RNA的起始用量为100ng,那么ATP稀释系数=5000/100=50。即将ATP稀释50倍(1μl的10 mM ATP加49μl的1 mM Tris,PH8.0)。
2、向冰浴中预冷的无RNase反应管中加入以下试剂至总体积25μl。
| 试剂 | 25μl反应体系 | 终浓度 |
| total RNA | Xμl | 可达2μg |
| 10×Poly(A)Polymerase Buffer | 2.5μl | 1× |
| 第“1”步中稀释好的ATP | 1μl | — |
| E.coli Poly(A)Polymerase, 5U/μl | 0.5μl | 2.5 U |
| RNase-Free Water | up to 25μl | — |
注意:反应中使用的total RNA必须含有小分子RNA。
此过程也可以直接使用小分子RNA(建议加入量为2-5μl。请根据目的miRNA的丰度来确定加入量)。
3、轻轻混匀上述反应液,短暂离心将液体收集于管底。37℃,孵育15分钟。此过程结束后,立刻进行第一链cDNA的合成,或于-20℃暂存。如需长期保存,建议存放于-80℃。
B.修饰后的miRNA cDNA第一链合成的过程:
1、向冰浴中预冷的无RNase反应管中加入下表中试剂,至终体积20μl:
| 试剂 | 20μl反应体系 |
| 上述Poly(A)反应液 | 4μl |
| UltraPure dNTP Mix,10 mM each | 1μl |
| RT Primer,25 μ M | 3μl |
| 5×UltraRT Buffer | 4μl |
| UltraRT | 0.5μl |
| RNase-Free Water | 7.5μl |
2、轻轻混匀上述反应液,短暂离心将液体收集于管底。42℃,孵育50分钟。
3、85℃,孵育5分钟,终止反应。合成的cDNA反应液可以直接进行荧光定量检测实验,也可以于-20℃保存备用。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
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