北京GST琼脂糖凝胶价格

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京GST琼脂糖凝胶价格，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京GST琼脂糖凝胶价格
品牌：百奥莱博
编号：WE0269
规格：10ml
产地：国产|进口
  本产品为基于三甘醇(16原子间隔臂)的谷胱甘肽琼脂糖，可快速、温和、特异性地纯化包含谷胱甘肽结合序列的非变性蛋白质，如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶等，尤其适用于在大肠杆菌、昆虫细胞和哺育动物细胞中表达的GST融合表达蛋白。该填料具有很好的物理和化学稳定性，使用寿命长，使用方便，批次重复性好，可一步分离得到纯度较高的目标蛋白，纯化条件温和，可保证蛋白的活性。

支持物：CL-6B琼脂糖凝胶
载量：5-10 mg GST标签蛋白/ml 填料
粒径：50-160μM

注意事项：
1、请勿将 GST琼脂糖凝胶冷冻、干燥和离心，整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
2、蛋白层析应使用高纯度的试剂和水，层析前缓冲液应用0.45μM滤膜过滤后使用。另外为防止柱子阻塞，上柱前建议将裂解液进行离心，或者使用0.45μM滤膜过滤。
3、GST 融合蛋白与还原型谷胱甘肽的结合比较缓慢，为获得最大结合量，上样流速建议为：0.2-1ml/min(6ml层析柱)，0.5-2ml/min(12ml层析柱)。对于吸附效果不好的样品，可以先把介质和样品混合，轻轻振摇 2-4小时，再装柱，用平衡缓冲液进行重新平衡、洗脱等操作，另外在细菌抽提试剂中添加5 mM DTT，可以显著提高GST标签结合能力。
4、不同的 GST 融合蛋白取得最佳纯化效果所需还原型谷胱甘肽浓度、洗脱体积和洗脱时间可能有所不同。必要时需对流穿液、洗脱液进行 SDS-PAGE 以及 Western 杂交分析，以确定最佳纯化条件。
5、GST 融合蛋白以包涵体形式存在时不能与介质结合，必须先进行变性、复性、透析处理后才能用介质进行纯化。建议优化蛋白表达条件尽量使蛋白可溶性表达。
6、如后续实验需要除去洗脱液中还原型谷胱甘肽，可采用超滤或透析的方法。

使用方法：

I 缓冲液的准备
1、结合缓冲液(PBS)：10 mMNa2HPO4，1.8 mMKH2PO4，140 mMNaCl，2.7 mMKCl，pH7.4
2、洗脱缓冲液：10 mMNa2HPO4，1.8 mMKH2PO4，140 mMNaCl，2.7 mMKCl，10 mM还原型谷胱甘肽(GSH)，pH7.4。将0.1 g还原型谷胱甘肽(GSH)溶于30ml 结合缓冲液，或将0.25 g溶于75ml结合缓冲液中。
3、再生缓冲液1：0.1 MTris-HCl，0.5 MNaCl，0.1% SDS，pH8.5
4、再生缓冲液2：0.1 M Sodiumacetate，0.5 MNaCl，0.1% SDS，pH4.5

II 样本制备
1、收集菌体后，每100 mg菌体(湿重)加1-5ml细菌蛋白抽提试剂(每1ml细菌蛋白抽提试剂中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)，如有需要可以超声裂解菌体。
注意：
1)当提取物粘度高时，建议加入DNase I和Lysozyme。每1ml 细菌抽提试剂中加入1μlDNase I(1000U/ml)，2μl Lysozyme(50 mg/ml)，DNase I和Lysozyme可单独从我公司购买，货号：Lysozyme(WE0214)、 DNase I(WE0213A)，或直接从我公司购买WE0261细菌蛋白抽提试剂盒，包含细菌蛋白抽提试剂、DNase I、Lysozyme和蛋白酶抑制剂混合物。
2)超声过程中保持菌液处于冰浴中，超声条件依赖于所使用的超声仪功率，探头种类，容器的大小形状，需实验中自己摸索，应避免连续超声导致溶液过热，可分成短时间，多次超声，最终以菌液变清即可。
2、10000rpm，4℃离心15分钟，将上清转移至新的已预冷的离心管中，然后用预冷的PBS Buffer重悬沉淀(每50ml裂解液的沉淀加入3ml PBS)。
3、分别取10μl上清和沉淀悬液进行SDS-PAGE电泳检测，以确定蛋白存在于上清或沉淀中。若目的GST融合蛋白形成包涵体(不可溶蛋白)，应在纯化以前以适当的方式进行溶解和重折叠。

III 组装层析柱
1、将Glutathione-Sepharose Resin混合均匀直至重悬，用吸管移取适量的填料至层析柱中。室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
注意：
1)填料的上层是乙醇保护液，将填料与乙醇一起混匀，以每ml填料纯化5-10 mg GST标签蛋白计算，取需要的填料与乙醇混合液加入层析柱中。
2)如果乙醇不流出，可以给柱子一个外力，例如用大拇指对柱口轻轻按压一下，迫使乙醇流出。
3)本实验都是通过重力作用使溶液流出。
2、加入5倍柱体积的去离子水洗涤，再用10倍柱体积的结合缓冲液平衡，平衡结束后即可上样。
注意：柱体积指的是填料的体积。

Ⅳ GST融合蛋白的纯化
1、将层析柱的出口连接上紫外蛋白监测仪，根据紫外蛋白监测仪观察280 nm处的吸收值来监控层析柱流出蛋白情况。
2、上样：将制备的蛋白样品用结合缓冲液等体积稀释后，加入到已平衡好的层析柱中，建议上样流速为： 0.5-1ml/min(6ml层析柱)，1-2ml/min(12ml层析柱)。观察280 nm吸收情况并收集流穿蛋白。
注意：
1)样品在上柱前可以离心或0.45μM微孔滤膜过滤。或者使用本试剂盒中附带的一块筛板，使用时先将筛板加至填料的上层，该筛板可用于杂质较多的蛋白的过滤，防止过多的杂蛋白堵塞柱子的作用。再将处理好的样品负载上柱，但是筛板放入柱子后就不易取出。
2)通过控制加入的菌体裂解液的速度或流出速度来控制柱流速，流速过快会影响柱效。
3、洗涤：使用10倍柱体积的结合缓冲液过柱，洗涤杂蛋白，观察280 nm吸收情况并收集杂蛋白。建议洗涤流速为0.5-1ml/min(6ml层析柱)，1-2ml/min(12ml层析柱)。
注意：建议洗涤液中加入蛋白酶抑制剂终浓度为1mM，如蛋白酶抑制剂混合物，以抑制蛋白酶活性。
4、洗脱：使用10-15倍柱体积的新鲜配制的洗脱缓冲液过柱，洗脱目的蛋白，观察280 nm吸收情况并收集目的蛋白。建议洗涤流速为0.5-1ml/min(6ml层析柱)，1-2ml/min(12ml层析柱)。
5、蛋白检测：分别取等量的流穿液，洗涤液和目的蛋白洗脱液进行SDS-PAGE以分析蛋白的层析情况。
6、洗脱后，依次用3-5倍柱体积的结合缓冲液和3-5倍柱体积的去离子水洗涤填料，再用2-3倍柱体积的20%乙醇洗涤(乙醇要将填料浸没)，封柱后2～8℃保存。

Ⅴ 柱再生
当填料使用多次后，结合效率会有下降，可用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1、使用5倍柱体积的再生缓冲液1洗涤填料，而后用5-10倍柱体积超纯水洗涤。
2、使用5倍柱体积的再生缓冲液2洗涤填料，而后用5-10倍柱体积超纯水洗涤。
3、保存：使用2-3倍柱体积的20%乙醇洗涤，将层析柱的头尾密封后(乙醇要将填料浸没)2～8℃保存。
4、再次使用时加入5倍柱体积的去离子水将乙醇洗涤后，使用10倍柱体积的结合缓冲液平衡填料，平衡结束后即可上样。

储存条件：2～8℃，避免冷冻

北京GST琼脂糖凝胶价格极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·Protein A琼脂糖凝胶
编号：WE0271
英文名称：Protein A-Agarose
规格：5ml
  本产品可从血清，腹水，细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物丌同亚型的抗体或包含抗体 Fc片段的基因工程重组蛋白。具有高IgG结合特异性，高流速，低Protein A-Agarose脱落等特点。

注意事项：
1、凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温后装柱，避免产生气泡影响柱效。
2、装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1，长径比过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径比过小将导致样品与填料接触时间短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。
3、若上样液中抗体浓度过高，应使用平衡缓冲液稀释至1-2 mg/ml，抗体浓度过高影响柱效。
4、可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5、凝胶用低pH缓冲液洗脱时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快中和至pH中性，以延长亲和介质的使用寿命。
6、洗脱后，应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4左右)，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
7、填料使用后应用0.1 M柠檬酸*缓冲液(pH3.0)做再生处理，长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命。

使用方法：

I 缓冲液的准备
1、平衡缓冲液：纯化不同动物和不同亚型抗体时所用平衡缓冲液是不同的，部分参照如下。

 

抗体	平衡缓冲液成分
人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b	20 mM PBS，300 mM NaCl，pH7.4-8.5
人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3	50 mM Tris-Cl，3 M NaCl，pH7.8-8.5

2、洗脱缓冲液：0.1 M柠檬酸*缓冲液，pH4.0。
3、再生缓冲液：1 M NaCl。
4、中和缓冲液：1 M Tris-Cl，pH9.0。
注意：
1)以上缓冲液使用前均需0.45μM滤膜过滤。
2)为提高抗体和介质的吸附力。可适当提高平衡缓冲液中的盐浓度和ph值。

II 样本制备
1、样品用平衡缓冲液稀释5-10倍。
2、细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰，去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。
注意：样品在上柱前需0.45μM微孔滤膜过滤。

III 操作步骤
1、将Protein A-Agarose填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2、向装填后的柱中加入3-5个柱床体积的超纯水将乙醇冲洗干净，用平衡缓冲液流洗5-10个柱床体积平衡柱子。
3、将样品上柱，上样流速60 cm/h。
4、平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积，直至基线平稳。
5、洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰，用中和缓冲液将洗脱收集样品中和到中性。
6、立即用5-10个柱床体积平衡缓冲液平衡柱子到中性。
7、再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。
注意：收集洗脱峰时可以分阶段收集到多个管中，最后根据测定结果重新调整收集方式。
8、本产品使用10次以上后先用20%乙醇洗5个柱床体积，再用70%乙醇洗脱5-10个柱床体积，再用20%乙醇流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。

储存条件：2～8℃，避免冷冻


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二甲*青FF溶液(1%)   10ml
M0504 10X FITC标记抗体保存液(用于浓标记物的长期保存)                    
SJ0567 Sulfo-NHS N-羟基硫代琥珀酰亚胺
ARB13729 兔核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)Elisa分析 Rabbit nuclear factor-κb p65,nf-κb p65 ELISA KIT
BTN100205 一站式DNA非变性PAGE电泳套装 One-Stop DNA Native PAGE Pack
ARB11166 人单纯疱疹病毒(HSV)ELISA检测服务 Human herpes simplex virus,hsv ELISA KIT
ARB11627 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子抗体(GM-CSF Ab)含量分析 Human anti-granulocyte-macrophage colony stimulating factor antibody,gm-csf ab ELISA KIT
无蛋白封闭液   500ml
5×DualColor蛋白上样液 双染料(还原) 5×DualColor Protein loading buffer5×1ml
ARB13456 鸡主要组织相容性复合体(MHC/B)elisa检测 Chicken major Histocomp*(代"a")tibility complex,mhc/b ELISA KIT
硫*(代"酸")鱼精蛋白溶液(10%)   5ml
ARB14098 人白细胞介素17F(IL-17F)elisa检测操作说明书 
甘*酸乙酯盐*(代"酸")盐 Magnesium dodecyl sulfate 623-33-6
3-吲哚丁酸 Ammonium citrate tribasic 133-32-4
F030506 FITC标记兔抗牛酪蛋白抗体 Rabbit Anti-casein*FITC
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·口腔拭子基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0179
英文名称：Swab Genomic DNA Extraction Kit
规格：50次|200次
  本试剂盒提供一种简单快速分离纯化口腔拭子样本总DNA的方法。该试剂盒采用可特异性结合DNA的硅基质膜和独特的缓冲系统，高效专一吸附DNA，每个拭子可得到0.5-3.5μg基因组DNA，提取的DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠。适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

试剂盒组成：

组份	50次	200次
Buffer GR	25ml	120ml
Buffer GL	25ml	120ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml	52ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml	75ml
Buffer GE	15ml	60ml
蛋白酶K	25mg	90mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml	5ml
吸附柱DS及收集管	50套	200套
离心管(1.5ml)	50个	200个

产品特点：
1、采用硅基质膜原理，简单、快速从口腔拭子中提取基因组DNA。
2、提取的基因组DNA片段大、纯度高。
3、单个拭子样本得率达到0.5-3.5μg。

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/5ml)的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
3、使用前若发现Buffer GL有沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴溶解。
4、全部离心步骤可在室温下进行。
5、取样：使用口腔拭子在口腔内壁擦拭6次，晾干2小时保存，为确保样本不被食物或饮料污染，取样前30分钟内请勿进食和饮水。

操作步骤：

1．将口腔拭子的棉签用剪刀从杆上剪下，置于2ml的离心管(自备)中，加入400μl Buffer GR。
注意：如需无RNA污染的基因组DNA，可加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀。
2．加入20μl 蛋白酶K 和 400μl Buffer GL，立即涡旋震荡15秒，充分混匀。
注意：加入Buffer GL后立即充分混匀；不可将蛋白酶K 直接加入Buffer GL中使用。
3．56℃放置10分钟，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4．加入400μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
5．将上步所得溶液和沉淀分两次加入到已装入收集管的吸附柱中，一次最多不超过700μl 。12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6．向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7．向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心3分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
8．12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
9．将吸附柱置于一个新的1.5ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)若需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

北京百莱博科技有限公司是蛋白质研究产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购北京GST琼脂糖凝胶价格。